什么是电泳

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分子生物学中，电泳是应用广泛的技术，从首代***测序技术的发明，到各种DNA分子以及蛋白质的分离、鉴定，无不用到了电泳。

顾名思义，电泳就是在某种介质中，通过电流使物质像游泳一样移动，在生物学对电泳的明确定义是带电粒子在电场的作用下，向相反的电极移动，并利用带电粒子在电场中迁移速度不同以达到分离目的的技术。简单来说，电泳就是将DNA或蛋白质在电场中通过介质的分子筛效应将不同分子量的分子进行分离的技术。

电泳用琼脂糖多为粉状物，不带电荷，凝点30°C，略高于室温，使用时需现用现配，溶质需和电泳时所使用的电泳缓冲液液一致；配置琼脂糖凝胶时，会有专门的制胶板(图1)和梳子(图2，用来预留点样孔)来制作凝胶块，配置凝胶时会加入荧光染料(部分荧光染料会有微毒，使用时应小心谨慎！)，免去电泳后染色的步骤。

核酸电泳制胶

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制胶：可以根据具体需要制作小胶、宽胶、长胶或方胶。

现分别介绍四种不同规格凝胶的制作方法。

1、小胶（6cm×6cm）：每个制胶器可以灌制两块小胶，Western blot报价，将选好的两个小凝胶托盘平行放入制胶器内，然后把您已经选好齿数（中间带缺口）的加样梳插入到制胶器的***槽中，倒入加热过的琼脂糖胶液（注意：凝胶液体温度控制在60℃左右，加样孔靠近负极一端）。

2、宽胶（12cm×6cm）：每个制胶器可以灌制一块宽胶，将选好的凝胶托盘平行放入制胶器内，然后将您选好齿数的加样梳插入到制胶器的***槽中，倒入加热过的琼脂糖胶液（注意：凝胶液体温度控制在60℃左右，加样孔靠近负极一端）。

3、长胶（6cm×12cm）：每个制胶器可以灌制一块长胶，将选好的凝胶托盘平行放入制胶器内，然后将您选好齿数的加样梳插入到制胶器的***槽中，倒入加热过的琼脂糖胶液（注意：凝胶液体温度控制在60℃左右，加样孔靠近负极一端）。

3、方胶（12cm×12cm）：每个制胶架可以灌制一块方胶，将选好的凝胶托盘平行放入制胶器内，然后将您选好齿数的加样梳插入到制胶器的***槽中，倒入加热过的琼脂糖胶液（注意：凝胶液体温度控制在60℃左右，加样孔靠近负极一端）。

核酸电泳常用染色液

1、***化乙锭（ethidium bromide， EB）

较为常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min，使非结合的EB褪色，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。

2、***橙（acridine orange， AO）：

***橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，Western blot，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但***橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。

3、亚甲蓝（methylene blue）

可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为 250ng。

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