转印电泳（湿转）实验的操作

转印电泳湿转方式的操作介绍

湿转（一般是恒压转印，100V，时间2h左右）：转印缓冲液，三明治结构 ，底层海绵，往上依次是3-4层滤纸，凝胶，膜，3-4层滤纸，海绵

海绵和滤纸在使用前要用转移液浸泡，在制作三明治结构时一定要避免凝胶干燥，滤纸内的气泡要用玻璃棒赶走

膜在用之前都要活化，PVDF膜要先浸泡5S-30s，然后在转移缓冲液中平衡，目的是活化膜上的正电基团，NC膜直接在转移液中平衡即可

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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

1.凝胶摄影

需配置分辨率较高的照相机，照相机固定架，近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。

操作需在暗室进行，将相机固定好，把凝胶放在紫外检测仪上适当位置，调焦，装上红色滤光片，按常规拍照。

亦可使用凝胶自动处理系统，但仪器费用较高。

2.EB溶液的净化处理

由于EB具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害***健康。

(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液，可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ，混匀，再加入等量的25mol/L HCl，混匀，置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:

① 按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢？

那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢？

1. 玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损，这样玻璃板受损处则不再平整，液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板，而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的，这种情况则需要一起更换。

有时由于清洗不到位，边条压片表面会有污物凸起，也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。

2. 两侧的夹扣变松，或有些厂家的夹扣为了防止漏液，设计的很紧，时间长之后，玻璃板被挤压变形，密封性下降。这样玻璃板也会从两侧漏胶。

3. 底座的胶垫老化、变形或错位，玻璃板底部会发生漏胶。

4. 桌面不平整，玻璃板上夹具时不容易放正，玻璃板安装到夹具上时是相对于底座橡胶垫倾斜的，这样玻璃板底部会发生漏胶。

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