电泳槽密封条漏液的原因与处理(垂直槽)
一般情况下,电泳槽较窄的密封条不易漏夜,反之较宽的则比较容易漏,发现电泳槽漏液时要检查:
1、密封条是否老化或损坏,若已经老化或损坏,云南水平核酸电泳槽,应更换密封条。
2、如果密封条完好无损,目测检查密封条是否有凹凸不平现象,如果有应将密封条拆下进行重新安装。安装时注意不要拉扯密封条,使其自然地嵌入密封槽内,并保证安装均匀,避免密封条出现凹凸现象。
3、如果缓冲液是从密封条的中间漏出,则说明漏处比两边凹(不在同一水平线上),我们则需要把密封条拆下,清理干净槽内胶粘剂,然后再将薄厚相当的窄边条(如0.4毫米)粘在槽内,以垫起凹下的密封条,使其与两边保持一致,此后再将密封条粘在槽内即可。
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电泳槽的使用方法
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1、 将凝胶密封条框放在平板上,然后将凹型玻璃板与平板玻璃重叠
2、 将两块玻璃立起来使其底端接触桌面,用手将两块玻璃板夹住放入电泳槽内,然后插入斜楔板(直面对玻璃,斜面对槽)到适中程度,即可灌胶
3、凝胶凝结后,轻轻取下梳子
4、用手夹住两块玻璃板,上提斜楔板,使其松开,然后取下玻璃胶室去掉凝胶密封框,注意在上述过程中手始终给玻璃胶室一个压紧力,再将玻璃胶室凹面朝里置入电泳槽,插入斜楔板,将缓冲液加至内槽玻璃凹口以上,外槽缓冲液加到距玻璃上沿3mm处即可电泳,注意避免在胶室下端出现气泡
5、加样时可用加样器斜靠在提手边缘的凹槽内,以准确***加样位置。盖好上盖,在电压150伏以下进行电泳分离,根据指示剂位置确定电泳时间。电泳结束后,关掉电源按住本体提手打开上盖,拔掉固定板,取出玻璃板,用刀片或薄板轻轻将玻璃夹层分开。本电泳槽同时可进行双板电泳,如果只跑一块胶时,需要在另外一侧用单胶替代板代替玻璃。
蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应
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分子筛效应:
大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时,受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ,这就是分子筛效应。
电荷效应:
蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区,但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同,因而泳动率也不同,因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时,电荷效应仍起作用。目前,PAGE连续体系应用也很广,虽然电泳过程中无浓缩效应,但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离,加之在温和的pH条件下,不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活,也显示了它的优越性。
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