蛋白质电泳槽WesternBlot垂直电泳制胶器漏胶问题分析

蛋白质电泳槽 Western Blot 垂直电泳制胶器漏胶问题分析

Western Blot转膜之前免不了要在蛋白质垂直电泳槽中跑胶分离蛋白质。关于制胶，大多数用户还是喜欢用电泳槽配套的制胶器来自己制胶跑电泳，经济实惠。但是很多实验室因为设备已经使用多年，常会发现垂直电泳槽的制胶器没有原来好用了，经常会有“漏胶”或者“漏液”的现象，也就是说，凝胶溶液还没有来得及凝固，就从玻璃板某个周围的某个缝隙“漏”出去了。

较糟糕的情况莫过于，漏液速度没那么快，刚加好溶液时看不出来有漏胶或者漏液，而等了半小时凝胶凝固之后才发现，玻璃板之间的凝胶已经偷偷地漏了一节下去，导致需要重新制胶。

用市面比较常见的制胶模具设计举例，在下图中可以看到，玻璃板中间盛装凝胶溶液，小型转印电泳槽厂家，玻璃板两侧靠夹子夹紧玻璃板和边条压片，下方用一个较厚的橡胶垫做密封，这样就组成了一个单侧上开口的三明治夹形状。

如果密封的好，凝胶溶液就会凝固成与边条压片厚度一致的凝胶用来做后续的蛋白质电泳。

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蛋白凝胶电泳的分类

蛋白凝胶电泳分为非变性凝胶和变性凝胶

所谓非变性凝胶，即在凝胶中不加SDS和尿素等变性剂，这种凝胶中，蛋白质仍保持活性，小型转印电泳槽生产厂家，其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

所谓变性凝胶，即在凝胶中加入变性剂，如尿素、SDS(十二***磺酸钠)、DTT等。这些变性剂可以***或改变蛋白质的结构，小型转印电泳槽厂商，把绝大部分蛋白质分离成组成它们的亚基。同时在蛋白质分子周围包围了大量负电荷。这种电荷基本上掩盖了无变性剂存在时正常就有的任何电荷。蛋白质在这种变性凝胶中的迁移率与它们分子量的对数成直线关系。因此利用变性凝胶进行电泳可以测得蛋白质的分子量。目前应用较多的变性剂为SDS。

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核酸电泳简史

核酸凝胶电泳分离核酸技术，始于20世纪60年代初。 那时，核酸主要基于沉积速度通过密度梯度离心法进行分离，分离情况由核酸的大小和构象决定。 密度梯度离心法不仅过程耗时，且需重型设备和大量的样品投入。 为寻求突破，研究人员开始探索电场作用下离子或电解液中DNA移动的特征—即 电泳的过程。

通过借鉴已经在蛋白质电泳中使用的技术，核酸电泳进一步发展，开始使用凝胶基质作为分离介质。 早期凝胶电泳实验的分离结果表明了，密度梯度离心分离法(早期确定的核酸分离方法)中沉积系数或 S 值的相关性。 随着20世纪60年代后期对琼脂糖生产的进一步了解和发展，琼脂糖逐渐取代琼脂成为首要选择凝胶电泳介质。

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