电泳槽内不导电
电泳槽内无电流(铂金电极上无气泡)
1、首先利用万用表检查电泳电源有无输出电压(注意选择直流电压挡,输出不得超过量程,以免损坏万用表)。
2、利用万用表电阻挡检查电泳槽导线是否导通。
3、利用万用表电阻挡检查电泳槽电极头与铂金丝之间是否导通,***检查电极头是否与连接铂金丝的焊片紧密连接,如发现松动请使用尖嘴钳将其紧固即可,完毕后再进行检测,若还没有电流通过则检查铂金丝是否断裂,若铂金丝有断裂迹象则需要和生产厂家的***服务部门联系,由厂家负责处理,一般需要对铂金丝进行更换处理。
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蛋白电泳
蛋白电泳样品的浓缩效应
1:凝胶孔径的不连续性:
浓缩胶为大孔胶;分离胶为小孔胶。在电场作用下,样品颗粒在
大孔胶中泳动的阻力小,移动速度快;当进入小孔胶时,受到的阻
力大,移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处,样品迁移受阻而压
缩成很窄的区带。
2: 电位梯度的不连续性:
电泳开始后,快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区,使局部电位梯度增加,将蛋白质浓缩成狭窄的区带
大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷,在电场中,都向正极移动。
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核酸电泳
核酸电泳凝胶的制备和电泳步骤
操作方法如下:
(1) 根据所需要的凝胶的大小将相应的凝胶托盘按正确位置放置在制胶器内;
(2) 称取适量琼脂糖,置电泳缓冲液中,加热使琼脂糖溶解;
(3) 待溶液冷至60℃,加入10mg/ml EB贮存液,使终浓度达0.5mg/ml;
(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳,将琼脂糖溶液倒入胶模中,厚度约3-5mm,注意避免产生气泡;
(5) 凝胶完全凝固后,移去梳子和透明胶,将凝胶放入电泳槽。加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm;
(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后,加入样品槽中;
(7) 接通电源,使样品槽在负极端,用1-5v/cm的电压,电泳适当时间;
(8) 电泳结束后,可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察,并拍照记录,也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟,再如上观察和拍照,记录结果。
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