电泳槽内不导电
电泳槽内无电流(铂金电极上无气泡)
1、首先利用万用表检查电泳电源有无输出电压(注意选择直流电压挡,输出不得超过量程,以免损坏万用表)。
2、利用万用表电阻挡检查电泳槽导线是否导通。
3、利用万用表电阻挡检查电泳槽电极头与铂金丝之间是否导通,***检查电极头是否与连接铂金丝的焊片紧密连接,如发现松动请使用尖嘴钳将其紧固即可,完毕后再进行检测,若还没有电流通过则检查铂金丝是否断裂,若铂金丝有断裂迹象则需要和生产厂家的***服务部门联系,由厂家负责处理,一般需要对铂金丝进行更换处理。
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蛋白电泳
蛋白电泳样品的浓缩效应
1:凝胶孔径的不连续性:
浓缩胶为大孔胶;分离胶为小孔胶。在电场作用下,样品颗粒在
大孔胶中泳动的阻力小,移动速度快;当进入小孔胶时,受到的阻
力大,移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处,样品迁移受阻而压
缩成很窄的区带。
2: 电位梯度的不连续性:
电泳开始后,快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区,使局部电位梯度增加,将蛋白质浓缩成狭窄的区带
大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷,在电场中,都向正极移动。
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蛋白电泳宜用垂直板电泳槽
蛋白质进行PAGE时,常用垂直板电泳。
垂直板电泳的优越性有:
a.表面积大而薄,便于通冷却水以降低热效应,条带更清晰。
b.在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳,便于在同一条件下比较分析鉴定,还可用于印迹转移电泳及自显影。
c.胶板制作方便,易剥离,样品用量少,分辨率高,不仅可用于分析,还可用于制备。
d.胶板薄而透明,电泳染色后可制成干板,便于长期保存与扫描。
e.可进行双向电泳。
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