核酸电泳染色液

核酸电泳常用染色液

1、***化乙锭（ethidium bromide， EB）

较为常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，电泳槽，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min，使非结合的EB褪色，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。

2、***橙（acridine orange， AO）：

***橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但***橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，小型转印电泳槽，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。

3、亚甲蓝（methylene blue）

可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，转印电泳槽，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为 250ng。

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转印电泳

转印电泳AG与LG反应的特点：特异性、比例性、可逆性

1，特异性：由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。

2，比例性：抗原与LG发生反应需遵循一定的量比关系。

3，可逆性：抗原LG结合形成复合物后，在一定条件下又可解离***为抗原与LG的特性。

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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

1.凝胶摄影

需配置分辨率较高的照相机，照相机固定架，小型蛋白电泳槽，近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。

操作需在暗室进行，将相机固定好，把凝胶放在紫外检测仪上适当位置，调焦，装上红色滤光片，按常规拍照。

亦可使用凝胶自动处理系统，但仪器费用较高。

2.EB溶液的净化处理

由于EB具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害***健康。

(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液，可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ，混匀，再加入等量的25mol/L HCl，混匀，置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:

① 按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

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