蛋白质进行PAGE时,转印电泳槽,常用垂直板电泳。
垂直板电泳的优越性有:
a.表面积大而薄,便于通冷却水以降低热效应,条带更清晰。
b.在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳,便于在同一条件下比较分析鉴定,还可用于印迹转移电泳及自显影。
c.胶板制作方便,易剥离,样品用量少,分辨率高,不仅可用于分析,还可用于制备。
d.胶板薄而透明,电泳染色后可制成干板,便于长期保存与扫描。
e.可进行双向电泳。
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转印电泳AG与LG反应的特点:特异性、比例性、可逆性
1,特异性:由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。
2,比例性:抗原与LG发生反应需遵循一定的量比关系。
3,可逆性:抗原LG结合形成复合物后,在一定条件下又可解离***为抗原与LG的特性。
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蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应
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分子筛效应:
大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时,转印电泳槽公司,受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ,这就是分子筛效应。
电荷效应:
蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区,但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同,因而泳动率也不同,因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时,转印电泳槽厂家,电荷效应仍起作用。目前,PAGE连续体系应用也很广,虽然电泳过程中无浓缩效应,但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离,加之在温和的pH条件下,不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活,也显示了它的优越性。
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