SDS-PAGE电泳

蛋白质在SDS-PAGE电泳中，迁移率只和其分子量相关

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PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。不连续的凝胶作为支持介质，电泳槽公司，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。

蛋白凝胶电泳的分类

蛋白凝胶电泳分为非变性凝胶和变性凝胶

所谓非变性凝胶，即在凝胶中不加SDS和尿素等变性剂，这种凝胶中，蛋白质仍保持活性，其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

所谓变性凝胶，电泳槽批发，即在凝胶中加入变性剂，如尿素、SDS(十二***磺酸钠)、DTT等。这些变性剂可以***或改变蛋白质的结构，把绝大部分蛋白质分离成组成它们的亚基。同时在蛋白质分子周围包围了大量负电荷。这种电荷基本上掩盖了无变性剂存在时正常就有的任何电荷。蛋白质在这种变性凝胶中的迁移率与它们分子量的对数成直线关系。因此利用变性凝胶进行电泳可以测得蛋白质的分子量。目前应用较多的变性剂为SDS。

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蛋白质进行PAGE时，常用垂直板电泳。

垂直板电泳的优越性有：

a.表面积大而薄，电泳槽哪家好，便于通冷却水以降低热效应，电泳槽，条带更清晰。

b.在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳，便于在同一条件下比较分析鉴定，还可用于印迹转移电泳及自显影。

c.胶板制作方便，易剥离，样品用量少，分辨率高，不仅可用于分析，还可用于制备。

d.胶板薄而透明，电泳染色后可制成干板，便于长期保存与扫描。

e.可进行双向电泳。

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