电泳槽简介
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电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分,生命科学电泳实验技术的迅猛发展主要也是体现在电泳槽上。根据蛋白电泳的原理,凝胶都是放在两个缓冲腔之间,电场通过凝胶连接两个缓冲腔。缓冲液和凝胶之间的接触可以是直接的液体接触,电泳槽,也可以间接通过凝胶条或滤纸条。垂直蛋白电泳大多采取直接液体接触方式。这种方式可以有效地使用电场,但在装置设计上有一些困难,如液体泄漏,用电安全和操作麻烦等问题.
电泳实验的技术原理
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电泳是带电颗粒在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下,每一种分子都具有特定的电荷(种类和数量)、大小和形状,在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同,各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。
带电颗粒在电场中泳动的速度称迁移率或泳动度。
电泳时,带电颗粒(球形)在介质中受力平衡匀速运动,则有:
v = F阻/f = FE/f = E·q/f = E·q/(6π·r·η)
v — 泳动度 F阻 — 颗粒所受阻力
E — 电场强度 q — 颗粒所带电荷
r — 颗粒半径 η — 介质黏度
FE — 颗粒所受电场力 f — 摩擦系数
由上式可见:泳动度与球形分子半径、介质粘度、颗粒所带电荷以及电场强度有关。 非球形分子(如线状DNA)在电泳过程中受到更大的阻力,即粒子的泳动度与粒子形状有关。
转印电泳湿转方式的操作介绍
湿转(一般是恒压转印,100V,转印电泳槽,时间2h左右):转印缓冲液,小型转印电泳槽,三明治结构 ,底层海绵,往上依次是3-4层滤纸,蛋白电泳槽,凝胶,膜,3-4层滤纸,海绵
海绵和滤纸在使用前要用转移液浸泡,在制作三明治结构时一定要避免凝胶干燥,滤纸内的气泡要用玻璃棒赶走
膜在用之前都要活化,PVDF膜要先浸泡5S-30s,然后在转移缓冲液中平衡,目的是活化膜上的正电基团,NC膜直接在转移液中平衡即可
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