转印电泳的一抗和二抗

转印电泳的一抗和二抗

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一抗孵育：将LG用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）

洗膜：用PBST或者TBST洗膜5 X 5min，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数

二抗孵育：二抗是辣根过氧化物酶(HRP)标记的LG， 摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可适当降低延长二抗孵育时间）

洗膜：用PBST或者TBST洗膜3 X 10min

T：Tween-20（去污剂）

转印电泳

转印电泳AG与LG反应的特点：特异性、比例性、可逆性

1，特异性：由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。

2，比例性：抗原与LG发生反应需遵循一定的量比关系。

3，可逆性：抗原LG结合形成复合物后，电泳槽，在一定条件下又可解离***为抗原与LG的特性。

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蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应

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分子筛效应：

大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ，这就是分子筛效应。

电荷效应：

蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区，电泳槽公司，但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同，因而泳动率也不同，因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时，电荷效应仍起作用。目前，PAGE连续体系应用也很广，虽然电泳过程中无浓缩效应，电泳槽厂家，但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离，加之在温和的pH条件下，不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活，也显示了它的优越性。

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