原***醛注意事项1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间***好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，***好做复孔。5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请***后乘以稀释倍数。6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。7.底物请避光保存。8.不要用其它生产厂家的***替换***盒中的***。原***醛常用标签包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白；其纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。His标签是由6个组氨酸（His-His-His-His-His-His）组成的短肽，专门设计用于重组蛋白的吸附纯化。由于分子量小，且较容易分离和纯化，是目前使用***广泛的一种。GST标签体系具有蛋白表达率高，表达产物纯化方便，利于GST***制备的特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从***裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到。GFP或其突变体EGFP等广泛用于***表达效率的检测，以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分别。GFP***不经可以检测GFP或其适当的突变体，也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内***，以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。Myc标签（序列为：EQKLISEEDL）已成功应用于WB杂交技术、***沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在***、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。Myc重组蛋白质可通过偶联Myc标签***到活化的琼脂糖上而进行亲和纯化。但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力，因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。HA标签系统利用一个HA（influenzahemagglutintinepitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于多种细胞类型，相应的HA标签***也被广泛运用。MBP标签蛋白大小为40kDa，由大肠***K12的malE***编码。MBP可增加在***中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在***中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP***或表达的目的蛋白特异性***检测MBP标签标记的重组蛋白。其余标签***还有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、***i、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HP***、HSV、KT3、KLH、MAT、ProteinA、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但应用相对较少。原***醛操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测***100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用***洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。)