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(1)称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。1U0|)iL/Y/?.](2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液,室温下避光搅拌20分钟。:|}%LN7?4e2g(3)将上述溶液装入透析袋中,对1mMPH4.4的醋1酸钠缓冲液透析,4℃过夜。(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液,使以上醛化桯RP的PH升高到9.0~9.5,然后立即加入10mgIgG(抗1体,或SPA5mg)在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中,室温避光轻轻搅拌2小时。9U#^amp;~.[7@(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液,混匀,再置4℃2小时。#BTn;v7CF*H5}(6)将上述液装入透析袋中,对0.15MPH7.4PBS透析,4℃过夜。0m#a#G5V#x,S7p,B其余步骤(纯化)同戊二1醛标记步骤的(6)、(7)、(8)。3)结果判定:除标记物IgG量的计算,略有不同以外,其余均同戊二1醛法。5{%^%U/TX-Z0U-aIgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62(Q:p$fX,F0};s4)***及器材:1x-RT/e$iQ(1)0.1MNaIO4:称取241mg高碘1酸钠(广州化学***厂,批号830602)溶于蒸馏水10ml中。(2)1mMPH4.4醋1酸钠缓冲液:?.p﹨5N)?(K0.2MNaAc(1.361克/50ml)3.7mlr%g;oamp;m2r7t4O0.2MHAc(0.601ml/50ml)6.3ml加蒸馏水至2,000ml。(3)0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液:3?!﹨$z*p7]gamp;X.E)z(fNa2CO30.32克;s3C.i!A5q1G/w4{NaHCO30.586克:H%EM!Ow-M加蒸馏水至50ml再用蒸馏水作20倍稀释,骆驼ELISA***盒,即成0.01MPH9.5的碳酸盐缓冲液。(4)NaBH4溶液(4mg/ml):临用时称取NaBH44mg溶于1ml蒸馏水中。h(i*[6J,H%T(5)其它的***及器材可参见戊二1醛标记法。3.工作浓度的选择在***酶技术中,首先要确定的变异因素就是酶标记物的工作浓度。因为酶标记物浓度的很小变化,便可导致试验结果产生很大的波动。另外,由于浓度过高,可使非特异性反应增加,而浓度过低又可影响测定的敏***。因此,正式试验前必须准确滴定其工作浓度。酶标记抗1体的滴定方法是:将抗原(或抗1体)物理吸附于固相载体上,然后将经过一系列稀释的酶标抗1体(或抗Ig抗1体)与吸附在载体上的抗原(或抗1体)起反应,以酶与底物的显色反应程度来确定酶标记抗1体的效价,或称工作浓度。安全性1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3.不要用嘴吸取***盒里的任何成份。4.***应按标签说明书储存,使用前***到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。6.不用的其它***应包装好或盖好。不同批号的***不要混用。保质前使用。7.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。8.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀***盒里的各种成份及样品。9.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。10.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,***。实验完成后应立即读取OD值。11.加入***的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。12.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。骆驼ELISA***盒-默沙克生物科技(在线咨询)由武汉默沙克生物科技有限公司提供。武汉默沙克生物科技有限公司()在生***工这一领域倾注了无限的热忱和热情,默沙克一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场,衷心希望能与社会各界合作,共创成功,共创辉煌。相关业务欢迎垂询,联系人:吴经理。)