鸡亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA***盒Elisa试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法1选择***选择质量优良的检测***，严格按照***说明书进行操作，操作前将***在室温下平衡至少30分钟。2加样可能原因：1）***或血浆标本分离不好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；3）加完标本再加酶***时酶溅出孔外。解决办法：1）标本为***：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。2)加样后及时放入孵箱。3)加酶***后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4)如果采用AT或其他全自动加样，***好选择FAME或其他后处理仪器加酶***。5)标本较多时，请分批操作。3孵育可能原因：1)孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；2)孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法：1)贴封片或加盖；2)按说明步骤严格控制操作时间。4洗板可能原因：1)采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。2)采用半自动***洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。3)反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法：1)保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后***好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；2)合理安排，或多用几台***。5显色可能原因：1)显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2)加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法：1)显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；2)加样时保持显色剂不外流；3)A、B液应避免接触金属器械。6终止可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。7读板如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸；尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。在实际操作中，除了选择优良***外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时做好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。鸡亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA***盒ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我公司将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期提高试验质量。鸡亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA***盒ELISA实验步骤：1.包被抗原：稀释液pH9.6碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。2.1%BSA(pH9.6碳酸盐缓冲液)封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。3.稀释抗***(可稀释不同浓度)0.1ml/孔，37oC30分钟，洗净。4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC40分钟，洗净。5.显色：TMB显色A液：四甲基联***10mg溶于***1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.B液：5ul***加蒸馏水12.5ml。终止液：2N***A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。6.450nm波长测OD值)