上海信帆基质金属蛋白酶（mmp-2/9）明胶酶谱***盒基质金属蛋白酶（mmp-2/9）明胶酶谱***盒的详细资料：基质金属蛋白酶(mmp-2/9)明胶酶谱***盒描述：基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、***重塑等过程，并参与***、***、***、***等许多***过程。血浆与***中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和***中的意义日益受到重视。本***盒采用酶谱法(zymography)检测MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一种广为使用的、基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1nM，高于ELISA方法2，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶谱)及活性。本***盒提供MMP-2、MMP-9特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5μl血液中的MMP-2、MMP-9酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。***盒可进行50次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可检测500~750个样品。基质金属蛋白酶(mmp-2/9)明胶酶谱***盒适用:检测MMP-2、MMP-9酶谱及活性（DetectMMP2andMMP9aslowas1nM）。组成与储存(50assays)：1.2×SDS-PAGEnon-reducingbuffer1.5mlμl,20oC；2.10×SubstrateG,50ml,20oC；3.10×BufferA,50ml,4oC,使用时用蒸馏水稀释；4.10×BufferB,50ml,4oC,使用时用蒸馏水稀释；5.SDS-PAGE凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液,4oC。检测步骤：1.制备含MMP底物蛋白的SDS-PAGE凝胶：推荐分离胶浓度为8%。按照标准程序制备SDS-PAGE凝胶。将10×substrateG融化，并90oC加热5分钟。分别在浓缩胶和分离胶中额外加入10×substrateG并使之稀释10倍，混匀后加入过***铵和TEMED，等待凝胶聚合。2.待测样品1:1稀释于2×SDS-PAGEnon-reducingbuffer(用完后可自行配制：4%SDS,100mMTris-ClpH6.8,20%glycerol,0.02%bromophnolblue)，混合后直接上样。切勿加热变性，并且仅使用不加还原剂的上样缓冲液。可通过预试验确定加样量，使用普通蛋白预染Marker即可。阳性对照(可选步骤)：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血与100μl2×SDS-PAGEnon-reducingbuffer等体积混合，取5-15μl上样。3.低电流恒流电泳，每一块小胶电流为20mA/gel。***酚蓝跑出凝胶前沿时结束电泳。4.洗涤凝胶：取出凝胶，去除浓缩胶，放入容器内.可先用适量蒸馏水冲洗凝胶，然后加入10ml1×BufferA(用蒸馏水稀释)，室温漂洗凝胶2×30分钟。中间换液。5.孵育：倒掉BufferA。加入10ml1×BufferB(蒸馏水稀释)，室温或37oC孵育1~5小时。阳性对照或者血中的MMP通常37oC孵育1小时即可显示。如MMP活性低，应延长孵育时间为10小时或过一夜。6.显色：倒掉BufferB，加入SDS-PAGE凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液（操作步骤见SDS-PAGE凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液说明书）。凝胶的大部分区域被深染，在有MMP条带的位置不被染色而形成透亮区域。透明区域的位置和范围指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶谱)及活性。阳性对照将在66~72(MMP-2)、92(MMP-9)、130(proMMP-9)、225(proMMP-9)kDa位置出现透明条带。7.条带扫描：将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP条带透明，但凝胶背景并非真正全黑。解决办法：可用非透射光扫描，或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示，并尽量设置为黑色.MMP条带则为白色，这种背景黑条带白的格式是英文***中***常见的格式。基质金属蛋白酶(mmp-2/9)明胶酶谱***盒说明1.10mM能够EDTA完全***MMP活性。2.凝胶干燥：可使用聚丙烯酰胺凝胶干胶装置室温快速干燥凝胶，作为***记录保留。基质金属蛋白酶(mmp-2/9)***盒http:///xfsw-ParentList-1246296/http:///st261110/ml)