豚鼠***蛋白酶D(CTSD)ELISA***盒笃玛生物***盒操作注意事项：1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。2.***应按标签说明书储存，使用前***到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。3.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。4.不用的其它***应包装好或盖好。不同批号的***不要混用。保质前使用。5.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀***盒里的各种成份及样品。7.加入***的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。9.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，***。实验完成后应立即读取OD值。豚鼠***蛋白酶D(CTSD)ELISA***盒标本要求1.***：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。3.尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸***、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入***蛋白萃取***，以使细胞***并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.***标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或***蛋白萃取***,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3***辣根过氧化物酶的（HRP）活性。豚鼠***蛋白酶D(CTSD)ELISA***盒ELISA实验步骤：1.包被抗原：稀释液pH9.6碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。2.1%BSA(pH9.6碳酸盐缓冲液)封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。3.稀释抗***(可稀释不同浓度)0.1ml/孔，37oC30分钟，洗净。4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC40分钟，洗净。5.显色：TMB显色A液：四甲基***胺10mg溶于***1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.B液：5ul***加蒸馏水12.5ml。终止液：2N***A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。6.450nm波长测OD值)