呕吐***（Deoxynivalenol）ELISA检测***盒（货号：MD200）特别提醒：本***盒有两种标准液，MAIZE呕吐***标准液用于测定玉米占比大的样品，其他样品采用呕吐***标准液，如果同时检测大量不同种类样品（包括玉米），采用呕吐***标准液。本***盒用于定量检测样本中呕吐***残留。检测样本：谷物、饲料样本前处理：-谷物（玉米、小麦）和饲料：研磨、***-水溶液提取、过滤、稀释（可选）；-硬质小麦：研磨、水提取、离心、稀释分析时间：20分钟（不包括样本前处理时间）检测限：-玉米、小麦和饲料：0.04ppm-硬质小麦：0.12ppm特异性：交叉反应率（%）分析物交叉反应率3-乙酰-呕吐***>100呕吐***10015-乙酰-呕吐***23-葡萄糖基-呕吐***64+/-16检测原理本***盒在预包被特异性呕吐******的微孔内进行。将酶标呕吐***和标准品或样本在预混合孔混合后转移到包被呕吐******的微孔，***次孵育时，标准溶液或样本中的呕吐***和酶标呕吐***竞争微孔上的呕吐******结合位点，洗板除掉所有未结合的酶标呕吐***或自由呕吐***分子。然后加入一定量显色底物反应以检测酶活性。加终止液终止反应，450nm波长***检测，标准品或样品中的呕吐***浓度与吸收光强度成反比。2.***盒组成微孔板：96孔，预包被呕吐******。板条可拆开单独使用。预混合板：空白，未包被***。MAIZE呕吐***标准溶液：5瓶，各1.5ml，浓度分别为：0ppm，0.04ppm，0.25ppm，1.25ppm，5ppm。呕吐***标准溶液：5瓶，各1.5ml，浓度分别为：0ppm，0.04ppm，0.25ppm，1.25ppm，5ppm。酶偶联物：1瓶，14ml。10X浓缩洗液：1瓶，50ml。显色液：1瓶，15ml。终止液：1瓶，9ml。3.需要使用但***盒不提供的***和设备-天平-***（小麦、玉米、饲料）-蒸馏水或去离子水-N***（小麦、玉米、饲料）-研磨器-摇床（可选）-离心机或滤纸-恒温箱-氮吹仪-20-200μl、100-1000μl移液器及吸头-20-300μl多道移液器及吸头-含450nm波长的***4.注意事项-仅用于体外检测。-一些***内含防腐剂；终止液内含有***，具有腐蚀性；酶偶联物对身体***。-小心操作，避免***接触皮肤、眼睛和粘膜。5.操作和存储说明-2-8°C冷藏保存，切勿冷冻。-将未用完的板条用***盒提供的铝箔袋重新密封。-切勿使用过期产品。-不同批次***盒内的成分不能混用。-请使用***盒内提供的说明书。6.样本前处理步骤6.1小麦、玉米和饲料-将样本混合均匀并充分研磨；-称取50g研磨样本，并加入10gN***，再加入250ml70%***溶液。可选方案：称取5g研磨样本，并加入1gN***，再加入25ml70%***溶液。-充分振荡3分钟。-过滤样本并收集滤液。用于检测的样本浓度范围应为0.04-5ppm。-如果样本浓度>5ppm，用70%***溶液将样本稀释5倍，使浓度范围为0.2-25ppm。建议样本的称取量为50g，以得到更好结果。6.2硬质小麦-将样本混合均匀并充分研磨；-称取50g研磨样本，加入10g纯氯化钠，再加入250ml70%***溶液；可选方案：称取5g研磨样本，加入1g氯化钠后再加入25ml70%***溶液。-充分摇晃15分钟。注意：建议用手摇晃或温和提取系统。也可以使用磁力搅拌器、振荡器或搅拌机，但结果会偏高。-过滤样本并收集滤液。注意：过滤过程会很慢，建议过滤前让样本先沉淀。作为可选方法，建议在3500g离心力下离心5分钟，收集上清液。-用100%***将上清液稀释3倍（1+2）（例如：100μl上清液+200μl100%***）。用于检测的样本浓度范围应为0.12-15ppm。-如果样本浓度>5ppm，用70%***溶液将样本稀释5倍，使浓度范围为0.6-75ppm。建议样本的称取量为50g，以使得到更具代表性的样本。7．工作溶液准备呕吐***标准品：即用；酶偶联物：即用；洗液：用蒸馏水1：10稀释（1+9）。注意：如果出现结晶，将溶液置于室温并搅拌直至结晶完全溶解。稀释后的洗液在室温放置24小时内有效，2-8°C放置两周内有效。显色液：即用。显色液对光敏感，应避免光直射，避光保存。终止液：即用。8.检测步骤8.1检测前注意事项-检测前将所有***室温放置1小时；-使用后立即将所有***放置于2-8°C；-不得改变检测程序；-不得延长或缩短孵育时间；-孵育温度不得高于25°C或低于18°C；-孵育过程中不得晃动酶标板；-使用精准的移液器及吸头；-一旦开始实验，不要间断地完成所有步骤，不要让微孔干透；-ELISA方法结果的再现性很大程度取决于洗板过程的效率和一致性，要按照介绍的程序洗板；-为避免交叉污染，加不同样品和标准品时要更换移液器吸头；-不得让吸头接触到微孔内的液体或者微孔内表面；-孵育时要避免光直射。建议孵育时用封板膜封板。8.2检测步骤1.计算需要用到的微孔数量，标记***大光吸收值孔、标准品孔和样本孔的位置。注意要考虑到都要做重复。取出需要的板条，并将未使用的板条重新用铝箔袋密封。准备同等数量的预混合板条。2.每个预混合孔加100μl酶偶联物。3.将标准品、样本加50μl到对应预混合孔。标准品和样本溶液含高浓度***，因此加入微孔前用移液器将溶液反复吹打几次。4.用移液器将预混合孔内溶液混匀（上下吹打3次），并立即吸取100μl到对应包被呕吐******的微孔。注意：吸取不同微孔溶液时，要更换吸头以避免交叉污染。5.室温孵育10分钟。不得延长孵育时间，孵育时不要晃动微孔板。6.洗板顺序-孵育后，倒掉孔内液体；-将微孔加满工作浓度洗涤液，然后倒掉洗涤液；-用力上下在吸水纸上拍板，将微孔内液体完全拍干。重复洗涤过程3次。在干净的吸水纸上拍板，拍干微孔内的液体。但不可使微孔干透。7.显色：用多道移液器加100μl显色液到微孔，来回晃动数秒钟。8.室温避光孵育10分钟。9.用多道移液器加50μl终止液到各孔。来回晃动数秒钟充分混匀。10.在1小时内，用***450nm波长读数。9.计算结果-计算标准品和样品的平均吸光值；-用计算得到的平均吸光值分别除以0标准品的吸光值并乘以100；标准品的吸光度值（或样品）----------------------------X100=(%)吸光度值0标准的吸光度值(Bo)-以标准品浓度值（ng/ml）的半对数值为横坐标，B/B0值为纵坐标绘制标准曲线；-将样本的B/B0值带入校准曲线，得到相应的浓度值；-要得到样本中呕吐***的浓度值，还需要将从校准曲线读到的浓度乘以相应样本的稀释倍数。-小麦、玉米和饲料：由于标准品浓度已经考虑了样本稀释倍数，从标准曲线读到的浓度值即为样本中呕吐***的浓度。-硬质小麦：稀释倍数为3。-所有样本：如果提取过程中进一步稀释5倍以得到更大浓度范围，则结果需要再乘以稀释倍数5.10．样品标准曲线示例11.结果评价计算出结果后，还需要验证检测效果。通过将得到的结果和说明书提供的技术参数比较验证。如果结果与参数不符，请检测***盒的有效期、读取吸光值使用的波长、以及操作过程是否正确。如果不是操作错误，请联系我们的技术支持。12.***盒参数描述参数平均Bo吸光度≥0.7OD450nmB/Bo50%0.06-0.5ng/ml13．免责声明出现阳性结果时，必须用确证方法对样本检测。TECNA公司不承担任何因为使用者错误使用***盒造成的损失。供应霉菌******盒******B1******M1玉米赤霉烯酮T2***赭曲霉***伏马***)