近日，英国科学家研究发现，存在与***血液的T细胞能够有效杀伤***细胞，改善***天然***系统。现在市面上用来分离T细胞的主要是T细胞分离***盒和尼龙毛法分离T细胞。T细胞分离***盒的原理主要是利用***包被的磁珠进行分离，可以有针对性的分离T淋巴细胞，但是价格昂贵，分离步骤繁琐。传统的分离方法——尼龙毛法，价格实惠，分离效果能满足科研工作者的需要，一直是T淋巴细胞分离的***佳选择。T淋巴细胞分离——尼龙毛法在研究体内及体外的***系统时，分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗***，所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力，从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵，而且操作简便，所需要的条件也不高，是一种非常实用的方法。首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(NylonFiber)，不是化工上的尼龙纤维，曾经有人问过我这种问题，如果你买错了，可是做不出来的！之前日本生产的尼龙毛填充好的柱子一直收到广大客户的欢迎，但是现在市面上商品化的尼龙毛柱子不再生产，大家自己能购买尼龙毛进行自己填柱。下面针对相关技术，做一操作说明，希望能为广大中国科研工作者提供服务。操作方法：1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃容器或***器内(要可以灭菌的)，填料的体积控制在15毫升左右(***器上有标记，所以还是比较好控制的)，因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率，所以要特别注意。***器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。2.加入大量的PBS平衡柱子后，用铝箔包裹，并置于适当的容器内，高压灭菌15分钟。3.灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内，顶部以铝箔覆盖，避免污染。4.***器下端，橡皮管，弹簧夹用无水酒精消毒。打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。5.首先，加入3-4倍柱体的无血培养基平衡，之后加入相同体积的含有***的培养基平衡（上述培养基都要预热），***后等培养基液面接近柱填料液面时，关闭弹簧夹。6.样本细胞悬浮液浓度控制在约5×108cells/ml，上样量一般是1/3-1/5柱体积。样品加入之后，再加入少量培养液，然后关闭弹簧夹。7.覆盖铝箔，垂直固定，置于消毒过的容器中，于培养箱内37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。8.从培养箱中拿出柱子，置于超净台内，除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管，加入适当体积经37℃预热的培养基，打开弹簧夹控制流速在3-4mL/min，流出约5ml之后，流出的培养液基变得不透明，此时其中含有T细胞，收集这一部分培养基。9.基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度，实际上，收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集，因为即使收集更多的量，回收率几乎不会增加。上述操作后，细胞的回收率为：15~20％T细胞含量：85~95％B细胞污染率：15％多数细胞被确定为T细胞。（注）收集粘附于尼龙毛上的细胞时，将T细胞收集完毕后的尼龙毛再无菌操作的状态下取出，转移到适当的容器中，用镊子小心的将尼龙毛松开，粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将***器芯插入***器内，通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。上海西宝生物科技有限公司能大量提供分离T淋巴细胞用的尼龙毛，欢迎选购。包装规格：10g、50g、100g、500g.更多相关产品，欢迎咨询：上海西宝生物科技有限公司电话：021-50272975/76/77/78-6221/6512/6236杨露13512172575***:1916572322俞婵13817370083***:2457655304杨树彦13788987962***:1961275959传真：021-50272982E-mail:trade@lifesci9@MSN:lifesci9@Http://地址：上海市张江高科技园区毕升路299弄11#502)