microRNA和piRNA研究AGO蛋白家族AGO蛋白家族是指与以小分子RNA(***allRNA)为介质的遗传***发现控制机构有关的蛋白质群。基于氨基酸序列的相似性，AGO蛋白家族又分为AGO亚族与PIWI亚族，已发现在生殖细胞、***（ES、iPS等）中有表达。和光纯药公司推出了众多用于对miRNA和mRNA（存在于细胞和***中的RISC的组成成分）进行功能分析的工具，这些工具不仅适用于对miRNA的分析，同时也适用于对靶标mRNA的分析。AGO蛋白家族AGO亚族PIWI亚族人AGO1,AGO2,AGO3,AGO4PIWIL1/HIWI,PIWIL2/HILI,PIWIL3,PIWIL4/HIWI2鼠AGO1,AGO2,AGO3,AGO4PIWIL1/MIWI,PIWIL2/MILI,PIWIL4/MIWI2RNA结合蛋白microRNA、siRNA等piRNA等1.microRNA研究microRNA（简称miRNA）是一种长约22个nt（核苷酸）的内源性RNA分子，通过与靶标mRNA的互补配对，可***mRNA的裂解和翻译，从而在动植物体内发挥重要的调控作用。据推测，在***和鼠体内存在上千种miRNA，因此对于miRNA的各种研究（例如对功能不明的新型miRNA的鉴定以及对与特定***相关的miRNA功能的说明等）迅速发展成为一大研究领域。近来，***中存在miRNA这一重大事实的发现，开创了利用miRNA作为生物标志物进行包括***症在内的******的***未来。一般认为，microRNA发挥作用的方式如下：先在细胞中经过多个阶段发育成熟，再与蛋白质结合生成蛋白质复合物“RISC”（“RNA诱导沉默复合物”），然后与RISC主要组成部分AGO亚族蛋白结合，***后再与靶标mRNA结合，从而达到降解mRNA链或***翻译的目的。***中存在4种AGO亚族蛋白（hAgo1～hAgo4），可泛表达***信息，但表达水平因类型而异。在AGO亚族蛋白中，只有AGO2具备对靶标RNA裂解的切割酶活性，因此是一种***具表达水平的蛋白质，可在miRNA合成途径中发挥至关重要的作用。由于RISC能够与AGO蛋白***发生***沉淀，因此可从RISC沉淀物中回收miRNA；而且进一步研究表明，靶标miRNA为共沉淀剂，因此***沉淀成法为研究miRNA功能的基本方法。鉴于上述情况，和光纯药特别推出了众多对miRNA功能进行分析的工具，其中主要为利用抗AGO***的miRNA研究工具。通过组合使用上述工具，即可实现对miRNA和mRNA（存在于细胞和***中的RISC的组成成分）的综合分析—miRNA分析和靶标mRNA分析。1）microRNA纯化***盒系列：一种基于利用AGO蛋白***的***沉淀方法特性：1）适用于内源性AGO蛋白的***沉淀法2）miRNA与AGO蛋白结合的纯化性能高3）其他RNA（如rRNA（核糖体）和RNA的降解片段）的污染度低4）适用于microRNA的******以及纯化microRNA成分的微阵列技术（测定***表达谱的方法和技术）microRNA提取***盒，人/鼠AGO1（10次反应；和光.：291-70201）microRNA提取***盒，人AGO2（10次反应；和光.：292-66701）microRNA提取***盒，鼠AGO2（10次反应；和光.：292-67301）microRNA提取***盒，人AGO3（10次反应；和光.：297-70301）（2）cDNA编码microRNA***盒的制备和光纯药microRNA******盒可以用于制备cDNA编码microRNA，只需在microRNA片段制备后的1.5日之内即可完成***过程。该***盒中含有从虾中提取的碱性磷酸酶（SAP），能与其中的耐热性单链DNA连接酶（另售）和原改良接头发生连接反应。与传统方法（利用从***中提取的碱性磷酸酶和T4RNA连接酶）相比，***效率显著提高。特点：1）耐热性连接酶能够实现接头的准确连接，从而提高***效率2）适用于microRNA***以形成二级结构3）操作简单，只需在1.5日之内即可生成cDNA编码microRNA和光microRNA******盒（8次反应；和光.：290-66501）接头连接***、准确、简捷耐热性单链DNA连接酶重组体解决方案（200个单位（和光.：298-65103）；500个单位（和光.：292-65101）和光靶标mRNA******盒（10次反应；和光.：298-68001）和光纯药生产的靶标mRNA******盒用于借助微量mRNA实现cDNA扩增，尤其是利用AGOIPRNA片段实现microRNA靶标mRNA***。扩增后的cDNA将成为microRNA的靶标mRNA。特点：1）方法简易2）具备实现微量mRNA扩增的性能3）cDNA扩增方式不依赖于mRNA的长度4）适用于microRNA靶标mRNA的研究和光PCR纯化***盒（30次反应（和光.：298-67901）和光纯药生产的PCR纯化***盒，用于在利用RT-PCR或PCR完成DNA合成后的仅10分钟内去除在各种分子生物学试验反应缓冲液中形成的引物、引物二聚体、dNTP（三磷酸脱氧核苷酸）以及诸如DNA聚合酶、限制性内切酶等多种酶。THUNDERTaqGoldDNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）（250个单位；和光.：317-07081）：PCR（聚合酶链式反应）用耐热性DNA聚合酶建议采用THUNDERTaqGoldDNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）来***非特异性扩增。THUNDERTaqGoldDNA聚合酶用于PCR的热启动，在进入PCR循环前，在95℃的温度下经过10分钟的热处理后被活化。由于利用THUNDERTaqGoldDNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）方式实现扩增后的DNA片段是一种腺***呤的3'末端，因此能够直接插入到T载体中。（3）***AGO1***、单******（1F2）（50μL（和光.：018-22401））〈用于蛋白质印迹法〉AGO1***、单******（2A7）（50μL（和光.：015-22411））〈用于***沉淀法〉抗人AGO2***、单******（4G8）（50μL（和光.：011-22033）；100μL（和光.：015-22031）〈用于蛋白质印迹法、***沉淀法以及***细胞化学染色法〉抗小鼠AGO2***、单******（2D4）（50μL（和光.：014-22023）；100μL（和光.：018-22021）〈用于蛋白质印迹法、***沉淀法以及***细胞化学染色法〉抗人AGO3***、单******（1C12）（50μL（和光.：018-23241））〈用于***沉淀法〉2.piRNA研究PIWIL1***、单******（2C12）(100μL（和光.：017-23451））〈用于***沉淀法〉特点：1)可***沉淀内在性PIWIL1蛋白质。（5～10?g浓度为10%的蛋白G微珠）2)可***沉淀PIWI1结合piRNA。3)可在人、鼠的***和细胞中使用。使用例：小鼠***中内源性PIWIL1的***沉淀（IP)-1Lane1:NEC14cells,mouseIgGIP分级(1/2vol.)Lane2:NEC14cells,2C12IP分级(1/2vol.)Lane3：小鼠***IgGIP分级(1/2vol.)Lane4：小鼠***,2C12IP分级(1/2vol.)Cellnumber:1x107cells***（小鼠***）重量25mg******（蛋白质印迹）AntiPIWIL1polyclonalantibody(giftedfromDr.Miyagawa,OsakaUniv.)Thisantibodyisnot***ailablefromWako.小鼠***中内源性PIWIL1的***沉淀（IP)-2LaneM：分子量MarkerLane1：小鼠IgGIP分级(1/2vol.)Lane2:2C12IP分级(1/2vol.)***（小鼠***）重量25mg******（蛋白质印迹）AntiPIWIL1polyclonalantibody(giftedfromDr.Miyagawa,OsakaUniv.)Thisantibodyisnot***ailablefromWako.laneM：分子量MarkerLane1：小鼠IgGIPRNA分级(1/2vol.)Lane2:2C12IPRNA分级(1/2vol.)***（小鼠***）重量25mg更多相关产品，欢迎咨询：上海西宝生物科技有限公司电话：021-50272975/76/77/78-6221/6512/6236杨露13512172575***:1916572322俞婵13817370083***:2457655304杨树彦13788987962***:1961275959传真：021-50272982E-mail:trade@lifesci9@MSN:lifesci9@Http://地址：上海市张江高科技园区毕升路299弄11#502)