荧光定量Q-PCR检测原理
荧光定量Q-PCR检测原理:荧光定量PCR常有两种检测方法1)探针法PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。2)荧光定量Q-PCR检测染料嵌入法使用荧光染料SYBR或EVGreen。荧光染料可以结合到双链DNA上面,当体系中的模板被扩增时,荧光染料可以有效结合到新合成的双链上面,随着PCR的进行,结合的荧光染料越来越多,被仪器检测到的荧光信号越来越强,从而达到定量的目的。荧光定量Q-PCR检测实验方法:1)引物设计2)RNA提取3)RNA逆转录合成cDNA4)realtimePCR反应5)数据分析荧光定量Q-PCR检测实验结果***表达量变化的直方图、热图等荧光定量Q-PCR检测http:///Products-mlhttp:///st397283/ml)