慢病毒包装原理
慢病毒包装原理慢病毒表达质粒包含了包装、***、稳定整合宿主细胞***组所需的遗传信息,包装辅助质粒则提供了所有的转录、包装和重组假病毒所需要的辅助蛋白。为产出高滴度的病毒颗粒,通常将表达质粒和包装质粒共同转染至包装细胞中进行病毒的包装。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外培养液中。通过收集含病毒颗粒的上清,进行浓缩和纯化可获得高纯度和高滴度的慢病毒。慢病毒包装步骤1)转染前1天,将293T细胞接种于10CM培养皿中,加入15mL含10%FBS的DMEM培养液,置37℃,5%CO2培养至约70-80%融合时,进行细胞转染。2)转染293T细胞(1)将慢病毒表达质粒和包装质粒加入到Opti-MEM中,混匀。(2)将适量的Lipofectamine?2000(invitrogen)加入到Opti-MEM中,混匀。(3)5分钟后,将上述两混合液混匀,室温静置20分种后,将混合液加入至培养皿中,前后左右晃动摇匀。置37℃,5%CO2培养箱中培养。3)6小时后,换含10%FBS的DMEM培养液10mL。4)转染48小时后,收集病毒上清,500g离心10分钟,0.45μm滤器过滤。5)浓缩纯化后,分装,-80℃保存。病毒包装http:///Products-mlhttp:///st397283/ml)
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