一氧化氮合成酶(NOS)活性测定***盒说明书规格：50T一、原理O2NOSL-Arg瓜氨酸+NONADPHNADP氧合Hb高铁Hb二、***1.磷酸钾缓冲液100ml2.缓冲液A40ml2.血红蛋白20mg(实验前需将血红蛋白需称15.48mg倒入A液，搅拌溶解，如有杂质进行过滤，一次用不完可放入-20℃保存)3.B液40ml4.C液40ml(用前将标有NADPH的小管中固体全部倒入C液瓶中，搅拌溶解，可分装后－20℃保存)5.NADPH11.96mg三、方法1.制备***匀浆：取******(***需用生理盐水冲洗),加入40mMpH7.2磷酸钾缓冲液10－20%（W/V）,匀浆搅拌,离心10,000转/分20min，取上清液（D液）。2.取A液0.8ml，C液0.8ml，D液0.6ml混合振荡，加入B液0.8ml，立即计时，振荡，比色。3.比色1)用双波长分光光度计：选择401nm和421nm，每隔30秒钟记录吸光值，计录到3min。2）如***波长分光光度计，可用分光光度计，先用401nm测定一个样品，再用421nm测定另一个样品，计录时间应一致，同样每隔30秒计录吸光值，共计录到3min。注：A：用的光径为1cm比色杯。B：对照用40mMpH7.2磷酸钾缓冲液。四、计算1.NOS活性单位表示法：每克***每分钟产生一氧化氮量（nmol）,即nmol/min每克***。2.计算公式：NOS活性＝[(a-b)-(a’-b’)]×194.3a:30秒时的401nm处的吸光值b:30秒时的421nm处的吸光值a’:90秒时的401nm处的吸光值b’:90秒时的421nm处的吸光值注：每分钟吸光值可以任意选择时间间隔，但必须是1分钟。五、保存4℃保存，有效期半年。)