无菌脱纤维马血标本的采集及保存1.***：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响***后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。***后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300pg/ml，150pg/ml，75pg/ml，37.5pg/ml，18.5pg/ml，9pg/ml，4.5pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制150pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记***的稀释原则：临用前以生物素标记***稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记***加990μl生物素标记***稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。无菌脱纤维马血人***说明：1、不含防腐剂；***病HIV，***TP、***HBV、丙肝HCV，四个标本检测均为阴性。未灭活，未***，不能用于临床2、为实验材料，以及作为动物***、病理组化封闭、***IGG制备、细胞培养、ELisa等***实验中的封闭及保护剂的使用。3、***解冻后有浊度或少量悬浮物，为蛋白聚合体，不会影响***的质量，如有必要用0.45um滤膜过滤。无菌脱纤维马血操作步骤试管法（改良Mayer法）1、致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1:2000），混匀，置37℃水浴30min。2、稀释***：待测***0.2ml，加应用液3.8ml，稀释度为1:20。3、配制溶血标准管：全溶血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀。50%溶血管:取全溶血管液2ml加缓冲液2ml。4、按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30min，第10管为非溶血对照：补体CH50测定试管法5、结果测定：取出试管，2000r/min离心10min，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长542nm、0.5cm比色杯）OD值，确定与标准管***接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：***补体CH50（U/ml）=（1/***用量）×稀释度。如第5管为终点管，测待测***中CH50为66.7U/ml。***补体CH50正常值为50-100U/ml。)