笃玛 鸡多配体聚糖4(SD***) ELISA ***盒 说明书
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鸡多配体聚糖4(SD***)ELISA***盒计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。鸡多配体聚糖4(SD***)ELISA***盒酶联***试验步骤将所需***从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需***到室温以充分溶解,每种液体***使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。加样反应:加标准品或样本50μl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50μl/孔,再加入50μl/孔的***工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。洗涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250μl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。显色:每孔加入底物液A50μl,再加底物液B50μl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟(若蓝色过浅,可适当延长反应时间)。终止:每孔加入终止液50μl,轻轻振荡混匀,终止反应。测吸光值:用***于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。鸡多配体聚糖4(SD***)ELISA***盒常用标签包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目标蛋白;其纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白的吸附纯化。由于分子量小,且较容易分离和纯化,是目前使用***广泛的一种。GST标签体系具有蛋白表达率高,表达产物纯化方便,利于GST***制备的特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从***裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。GFP或其突变体EGFP等广泛用于***表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分别。GFP***不经可以检测GFP或其适当的突变体,也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内***,以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。Myc标签(序列为:EQKLISEEDL)已成功应用于WB杂交技术、***沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在***、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。Myc重组蛋白质可通过偶联Myc标签***到活化的琼脂糖上而进行亲和纯化。但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力,因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。HA标签系统利用一个HA(influenzahemagglutintinepitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签***也被广泛运用。MBP标签蛋白大小为40kDa,由大肠***K12的malE***编码。MBP可增加在***中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在***中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP***或表达的目的蛋白特异性***检测MBP标签标记的重组蛋白。其余标签***还有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、***i、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HP***、HSV、KT3、KLH、MAT、ProteinA、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但应用相对较少。)
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