病毒构建包装重组腺病毒-慢病毒构建包装服务为促进国内相关领域的研究进展，RealGene从2008年开始，对国内实验室开展重组腺病毒/慢病毒构建、包装及扩增服务，可以由客户提供自己的***，完成腺病毒/慢病毒构建、鉴定、包装的服务。一、技术路线：（一）A、腺病毒载体构建：本系统是以Ad5***型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架，在***、包装、扩增等各部条件做了改进和优化，达到了***阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基础上，还拓展了更广泛的应用，可以提供各种带报告***的，带不同标签的腺病毒构建和包装服务。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导，***转位，Co-IP，动物实验，***研究等科研实验。并且可以完成较高难度的***构建，包括具有细胞毒性作用***的腺病毒构建，在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。***目的***到穿梭载体（中介载体）及鉴定根据客户提供的原始质粒信息确定***方案：如果原始质粒与本系统所用穿梭载体有匹配酶切位点，采用相应的内切酶切下相应片断，回收并连接到穿梭载体。酶切，测序鉴定；如果原始质粒与本系统所用穿梭载体没有匹配酶切位点，设计带有特殊接头的引物进行PCR扩增，得到目的片断，采用相应的内切酶切下相应片断，回收并连接到穿梭载体。酶切，测序鉴定；对于不适用于以上方案或者有特定要求的样品，与客户协商定制具体实施方案2）***目的***到腺病毒载体pAdPL及鉴定利用重组技术将目的片段的表达框从穿梭载体转移到腺病毒载体。酶切鉴定阳性***，将阳性***测序二次鉴定。B、慢病毒载体构建慢病毒（Lentvirus）载体是以HIV-1（人类***缺陷I型病毒）为基础发展起来的******载体，该载体可以将外源***有效地整合到宿主染色体上，达到持久性表达的效果。可有效地******元细胞、肝细胞、心肌细胞、***细胞、内皮细胞、***等多种类型的细胞，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。（二）病毒包装、扩增：将鉴定正确的******到慢病毒载体，与辅助载体一起转染293T细胞进行包装；将包装好的病毒***离心收集；将浓缩病毒进行滴定，滴定结果单位为PFU/ml（一般为5×108PFU/ml以上，体积为500μl以上，根据客户需要，不同量有价格差异）二、质量控制与鉴定：测序鉴定根据特定引物作RT-PCR鉴定蛋白表达鉴定（根据客户要求并由客户提供高特异性***）三、客户须知：对于客户所要构建腺病毒的目的***，客户须提供详细的***相关信息，包括***序列，载体序列，载体图谱。载体构建步骤所需时间，根据不同构建方案，需15到25个工作日。从合同签订之日起，客户需交纳首期技术服务费（50%服务费），方可进行实验。服务结束时一次结清余款。客户需提供的信息及材料：插入目的片段序列信息，原始载体序列信息，载体图谱，酶切分析图等。鉴定正确的原始质粒，PCR引物及PCR鉴定方法说明（包括PCR体系及PCR条件）（非必需，或需协商），测序引物（非必需，或需协商）。原始质粒的酶切鉴定报告、测序报告，如果客户确定***的信息无误，这条非必需。实验目的、要求，目的***有无细胞毒性，是否需要构建对照病毒？实验要求包括：是否自行构建腺病毒载体？是否要求更换启动子、polyA等***元件？实验目的包括：用于细胞实验还是动物实验，需要***的细胞类型或动物模型类型。四、我们的承诺：构建腺病毒/慢病毒载体的时间约15到25个工作日。病毒的包装，扩增的时间约20到30个工作日。总计需要45-55个工作日。提供重组穿梭载体或者siRNA载体，重组腺病毒载体的酶切及测序报告。免费提供一管阴性对照（仅限通用型的，如果客户指定的序列，需要另外计费）。***大插入片段5kb－8Kb。补充说明：如果客户需更换启动子，需保证所插入的***的表达产物对细胞无***作用，如果插入的目的片段太长，客户要求测序验证全长，需要提供***的特异引物，以测得全长，加收一定的费用。五、腺病毒和慢病毒比较表腺病毒载体系统和慢病毒载体系统比较病毒表达系统腺病毒表达系统（Adenovirus）慢病毒表达系统（Lentivirus）病毒***组双链DNA病毒RNA病毒***自主***自主***是否整合病毒***组游离于宿主***组外，瞬时表达外源***病毒***组整合于宿主***组，长时间、稳定表达外源******细胞类型***分裂和不分裂细胞***分裂和不分裂细胞，适合难转染的原代细胞（如***细胞，淋巴细胞）及体内实验表达丰度高水平表达中水平表达表达时间快（1-2天）慢(1-3天)滴度滴度高达1011pfu/ml滴度***高可达108pfU/ml***容量可插入高达8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低可插入不超过8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低***原性高***原性低***原性-Email:info@.cn;-电话:+86-21-54460771(手机):+86-15221180720-传真:+86-21-54460772Q/A-->)