PCR革新技术-英国TwistDxInc公司开发恒温扩增RPA英国TwistDxInc公司开发的重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术，目前***新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp?核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C-42°C之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。目前，TwistAmp?***盒的扩增子长度在500bp以内。不过，经过特别优化的RPA扩增，也可以生成更长的扩增产物，或者减慢扩增速度(便于定量)，甚至在更低的温度下进行反应。RPARPA便携、等温，可替代PCR，非常适合用于分子检测***、动物、食品安全、生物防御和农业中。速度——检测时间15分钟以内；敏感度——单分子检测，不需要thermocyler；简单——稳定的冻干***，几乎没有硬件要求的可靠等温技术。1.TwistAmpBasic***盒（96次）2.TwistAmpexo***盒（96次）3.TwistAmpnfo***盒（96次）4.MileniaHybridtech1侧向流***条5.MileniaHybridtech2侧向流***条如何提高扩增曲线的可重复性?A优化扩增曲线考虑以下因素:对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为mastermix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。TwistDxTwistDxInc.由分子生物学家兼蛋白生***学家NiallArmes博士以及DerekStemple博士和NageshMahanthappa博士于1999年共同创立，其总部位于英国马萨诸塞州剑桥市。TwistDxLimited于2002年成立，其运营设施位于英国剑桥。我们的愿景：TwistDx希望将RPA分子检验和技术普及到所有可应用领域，使科学家和技术开发人员不再受到高温DNA扩增技术的束缚。)