RPA技术的基本原理RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物***了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp?Basic)含有DNA扩增所需的所有***，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp?exo结合了专利的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。RPARPA便携、等温，可替代PCR，非常适合用于分子检测***、动物、食品安全、生物防御和农业中。速度——检测时间15分钟以内；敏感度——单分子检测，不需要thermocyler；简单——稳定的冻干***，几乎没有硬件要求的可靠等温技术。1.TwistAmpBasic***盒（96次）2.TwistAmpexo***盒（96次）3.TwistAmpnfo***盒（96次）4.MileniaHybridtech1侧向流***条5.MileniaHybridtech2侧向流***条TwistDx相关问题1.RPA能实现多重化吗?可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过，多重化的引物组合需要精心设计，以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是，RPA反应的引物总量(nmol)尽量不要超标太多。如果在-一个反应中使用两个以上的扩增引物，就应该控制不同引物的量。另外，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。2.能否对模板进行定量?可以。扩增子达到可检出水平的时间，依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多，扩增子就越快达到可检出水平。不过，这种定量需要精心的实验安排，确保对照反应是同时开始的。举例来说，可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一一旦进入体系，RPA反应就会开始。此外，较慢的扩增过程有助于更精准的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。3能否进行荧光终点分析?可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。5跑胶前需要回收RPA产物吗?需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。RPA是什么？自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。英国TwistDxInc公司开发的重组酶聚合酶扩增（RecombinasePolymeraseAmplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp?核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。)