Pfu DNA polymerase
PfuDNApolymerasePfuDNApolymerase是目前已知DNA合成准确性最高的酶。在正常的PCR扩增程序下,其扩增产物的错误率为4000bp中发生一个。错误率仅为TaqDNApolymerase的1∕7--1∕10。PfuDNApolymerase的耐高温性亦优于TaqDNApolymerase,变性温度可高至98℃(此时必须加矿物油以免反应组分蒸发)以扩增GC含量较高的模板。通常PfuDNApolymerase的扩增程序为:变性温度94℃-98℃,5-10分钟变性温度94℃-98℃,15秒-2分钟复性温度40℃-68℃,30秒-2分钟延伸温度68℃-75℃,扩增速率1分钟1Kb,根据目的片断长度另加15秒至1分30秒,PfuDNApolymerase的最适温度在74℃左右。扩增25到35个循环。注意事项:1.PfuDNApolymerase由于具有校正功能,DNA合成速率慢于TaqDNApolymerase,同时所需的dNTP量一般要高于TaqDNApolymerase,一些小公司的dNTP浓度往往低于其标定值有时甚至要低一倍左右,导致PfuDNApolymerase的扩增失败。2.PfuDNApolymerase产生的片断为平末端,不能直接用于T-载体克隆,可用TaqDNApolymerase加A末端后再用于T-载体克隆或直接在引物的5’端设计合适的酶切位点,酶切后再克隆到相应酶切载体。3.保存在-20℃。本产品PfuDNApolymerase的Storagebuffer组分为:50mMTris-HCL(pH8.2at25℃),0.1mMEDTA,1mMDTT,50%甘油,0.05%CHAPS;10XReactionbufferwithMgSO4的组分为:200mMTris-HCL(pH8.8at25℃),100mMKCL,100mM(NH4)2SO4,20mMMgSO4,1.0%TritonX-100,1mg/mlBSA。)