干细bao培养诱导分化干细bao是一类具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞，理论上具有无限分裂能力，在特定条件下，可分化成特定***。通常改变***ES细胞不分化状态的培养条件，ES细胞就可以分化成多种细胞类型。ES细胞具有的这种能力在体外增殖并保持未分化状态及其多向分化潜能的生物学特性，使其广泛应用于生物学研究的各个领域，它的潜在***应用价值已成为世界范围内研究的热点。目前，已报道的自ES细胞诱导分化的细胞主要包括胰岛细胞、造血细胞、肝细胞、***细胞、脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软gu细胞和黑素细胞等。小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞，采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacidphosphatase，TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测，实验外包公司，并进一步采用RT-PCR对破骨细胞标志酶***基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP和***蛋白酶K(CathepsinK)的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP()多核细胞形成13天TRAP()多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现，随着培养时间的延长，陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志***TRAP在共培养3天时开始表达，而MMP-9和CathepsinK则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力，该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.细胞ELISPOT检测1．培养板的预处理：在24孔培养板内加0.5ml0.2%戊er醛，37℃，4h，弃掉板中的处理液，用PBS洗涤3次，每次3min；2．抗原包被：将适量抗原溶于包被缓冲液中，每孔加入0.5ml，4℃过夜，PBS-T洗涤3次，每次3min；3．制备细胞悬液：将待测已致敏小鼠处死，取出pi脏，置于加有Hanks液的平皿内，用钝头直角9号zhu射器针头破少许脾被膜后，赶出细胞，用毛细吸管轻轻吹散细胞团后，将悬液通过250目尼龙网，取滤液，南京实验外包，1000r/min离心5min，Hanks液洗涤3次，计数细胞后，用1640液重新悬浮细胞，配成所需浓度；4．往各孔中加入0.5ml含不同浓度（104-106/ml）的细胞悬液，置37℃，5％CO2条件下孵育2-4h，弃掉培养液，PBS-T洗涤3次，每次3min；5．往各孔中加入0.5ml生物素化抗ti（Bio-Ab）（2μg/ml），37℃孵育1h或4℃过夜，弃掉液体，PBS-T洗涤3次，每次3min；6．加入辣根过氧化物酶结合的亲合素（***i-HRP）（2μg/ml），37℃孵育30min，整体实验外包，弃掉液体，PBS-T洗涤3次，每次3min；7．配制明胶-底物液：在37℃水浴中，将2.5mlTMB溶液（4mg/mljia醇溶液）滴加入7.5ml10%明胶溶液（用pH5.0磷酸钠-柠檬酸缓冲液配制）边加边搅，溶液呈白色，加入14μl3%H202；8．显色与计数：将培养板底冰浴，每孔加入0.6ml明胶-底物液，约3min，混合液凝固，将培养板取出，实验外包服务，置室温5min，将板倒置，用肉眼和低倍放大镜计数所显示出的颜色的斑点。英瀚斯(图)-实验外包公司-南京实验外包由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司（www.enhancer-/）位于江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前英瀚斯在技术合作中享有良好的声誉。英瀚斯取得商盟认证，我们的服务和管理水平也达到了一个新的高度。英瀚斯全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)