武汉迈斯普生物科技有限公司是一家专业从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。这样，若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存回在GFP信号，说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某答物质亚细胞定位的目的。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向全国提供的生物技术服务。分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，取100μL放在含有1.0cm2洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10μLpCambia2301-GaMYB2-GFP质粒，逐步加入40μL0.1mol·L-1亚精胺和100μL2.5mol·L-1CaCl2，振荡混匀。实验用途：因为蛋白的功能和位置是对应的，例如一个光合作用相关的蛋白一定要定位在叶绿体内，所以通过亚细胞定位技术服务研究可以进一步佐证出目标蛋白的功能。基因枪GDS-80轰击时氦气罐的气压为1300psi，取10μLDNA包裹好的微粒悬浮液加到基因枪中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。武汉迈斯普生物科技有限公司是一家专业从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。5、Marker种类：线粒体、叶绿体、细胞核定位、细胞膜定位、内质网6、可以在实验后保留瞬时转染的叶片供后续检测。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向全国提供生物技术服务。1，3-二磷酸甘油酸转变成3-磷酸甘油酸时产生一分子ATP。磷酸烯醇型酸转变成酸时又产生1分子ATP，此反应由酸激酶催化。GFP，实际是给你要研究的物质加上标记，在此相当于报告蛋白1653的作用。酸接收酵解过程产生的1对氢而被还原成乳酸。乳酸是糖酵解的终产物。2．关键酶糖酵解途径中大多数反应是可逆的，但有3个反应基本上不可逆，分别由己糖激酶(或葡萄糖激酶)，6-磷酸果糖激酶-1和酸激酶催化，是糖酵解途径流量的3个调节点，所以被称为关键酶。在体内，关键酶的活性受到代谢物(包括ATP，ADP)和(如胰岛素和胰素)等的周密调控。3．生理意义糖酵解的生理意义在于迅速提供能量尤其对肌肉收缩更为重要。此外，红细胞没有线粒体，完全依赖糖酵解供应能量。神经、白细胞、等代谢极为活跃，即使不缺氧也常有糖酵解提供部分能量。亚细胞定位实验本质上，既然是荧光双染技术，蛋白质本身没有荧光，有多种办法使它带上荧光信号，一是GFP（绿色荧光蛋白）融合标记，二是免1疫荧光标记，通过带有荧光的抗1体直接或者间接识别蛋白。GaMYB2在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析：采用基因枪轰击的方法，用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击，暗培养过夜后，在激光共聚焦显微镜下进行观察，从图A中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光，为组成型表达。标记完成后在激光共聚焦显微镜下观察荧光信号的叠加情况，如果能与细胞器等Marker蛋白信号重叠则可说明目的蛋白定位情况。很多情况下用GFP（绿色荧光蛋白）融合标记目的蛋白，用荧光抗1体标记细胞器。蛋白质亚细胞定位的工具现在已经很了，但是基本的理论近年来没有重大突破，预测结果也需要实验验证。4）用针头在植物叶片上避开叶脉扎孔，用无针头将侵染菌液从扎孔处注射至植物叶片内。比较好的工具有ProteomeAnalyst(个人感觉较准的，但是有些蛋白预测不出来)，pTarget，WolfPsort，Nucleo（针对核定位），TargetP。不同工具特性也不太一样。可以参考一下工具的发表时间和发表杂志的分量，然后把各种工具的结果综合一下。)