细胞培养时可能导致***的原因：1.细胞传代次数比较多，一定要控制细胞传代次数！大量扩增细胞，将细胞进行冻存，在必要的时候重新复苏。2.胰酶消化时间太长，胰酶消化时间过长容易导致细胞状态不佳以及胞质疏松;细胞传代时需要留意胰酶消化的时间。消化过度，在消化细胞时会对细胞的表面蛋白有较强的损伤，所以消化的时间不能过长，建议使用合适浓度和pH值的消化酶，否则会导致细胞***和分化。在悬浮培养模式下，细胞可以通过不同的容器进行扩大：摇瓶、玻璃生物反应器、不锈钢生物反应器、培养袋及一次性搅拌容器。有报道采用HEK293T细胞进行扩增、转染、慢病毒生产可以用一次性的生物反应器实现50L的规模。利用悬浮细胞瞬时转染大规模生产慢病毒是可行的，并且显示出良好的产量。但是，在转移到工业生产之前，该技术还需要进一步完善。优化的主要瓶颈是转染过程本身，它需要大量质粒DNA，从而使生产过程极其昂贵。多肽的稳定性研究，引起多肽不稳定的原因：（1）脱酰胺反应：在脱酰反应中，Asn/Gln残基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脱酰胺反应的进行。在Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解，位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。（2）氧化：多肽溶液易氧化的主要原因有两种，一是溶液中有过氧化物的污染，二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中，Met、Cys和His、Trp、Tyr等易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。)