反相色谱影响因素(1)柱长有机小分子和肽类的分辨率随柱长的增加而增加．但是柱长增加并不能使蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率显著增加．它们在较短的柱子上往往也有很好的分离效果。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附剂也常用作快速色谱的固定相使用。(2)流动相的流速。有机小分子和肽类的分辨率对流动相流速非常敏感。而蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率则不然。流速越小，柱子越长，色谱峰的宽度就越大，分辨率就越小。制备色谱上样过程中的流速对动态吸附容量影响很大。(3)温度。温度上升，流动相黏度下降，流动速度加快，且流动相与固定相之间的传质速度加快，使分辨率增加。同时，温度上升，分子热运动增加，疏水性作用减弱。升高温度要考虑目标物质的热稳定性。(4)流动相组成。流动相的极性越大，溶质的分配系数越大，洗脱时间越长。RPC多采用降低流动相极性(水含量)的线性梯度洗脱法。水是极性强的溶剂，在反相色谱中常常和基础溶剂配合使用，向流动相中加入不同浓度的、可以与水混溶的有机溶1剂，以得到不同强度的流动相，这些有机溶1剂称为修饰剂。反相色谱中的有机溶1剂。此外，乙醇、四氢呋1喃、异丙1醇及二氧六环也常被用作修饰剂。有机溶1剂梯度的大小也会影响分辨率，一般梯度越小，分辨率越大。漏液：液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生漏液，那就是故障所在。漏液的原因分两种：接触硬件不当：在更换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。与HIC一样，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非极性基团所覆盖，表现出强烈的疏水性。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选项用PEEK接头是一较好是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会漏液，一种不当就是力度把握不好，拧得太紧或太松；另一种不当就是致命的错误：滑丝，这往往是动手能力不太强，螺丝钉很少拧的工作者犯的错误，滑丝的后果不仅是漏液那么简单，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验，那就是拧螺丝。注意事项：1、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2、柱子是非常脆弱的，做的方法，先不要让液体过柱子。3、所有过柱子的液体均需严格的过滤。4、压力不能太大，至好不要超过2000psi。LC-100液相色谱系统可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。不过，输送泵漏液并不是非得马上修不可，冲洗干净并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。LC-100液相色谱系统的技术动态：液相色谱和质谱连接，可以增加额外的分析能力，能够准确鉴定和定量像细胞和***裂解液，血液，血浆，尿液和口腔液等复杂样品基质中的微量化合物。LC-100液相色谱系统提供了一些独特的优势，包括：1、快速分析和流转所需的少样品准备。2、高灵敏度并结合可分析多个化合物能力，甚至可以跨越化合物的种类。3、高度，高分辨率鉴定和量化目标分析物。显示错误提示信息：灯无点燃、灯能量不足、设定参数错误。自动测定D2灯及W灯的开启次数、灯状态、灯点燃时间、灯能量、设定D2灯及W灯状态。针对复杂混合物中各化合物在不同波长下的响应差异，用时间程序切换波长进行分析，与传统紫外-可见检测器相比，能够极大程度提高所有化合物的测定灵敏度。制备液相色谱仪采用进口光电二极管阵列作为光电检测元件，无需任何机械部分调整、选择和改变波长，仪器使用过程中不会引起波长的改变，与常规的单色仪相比有良好的波长准确度和重现性，使得分析结果更加可靠。)