随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。手动进样器首先检查手动进样器是否有渗漏，一般是由于污染使转子磨损或用尖头的针扎进手动进样器，划伤了转子。液相色谱仪成为解决生化分析问题有前途的方法。由于液相色谱仪具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生***学、食品分析、研究、环境分析、无机分析等各种领域。液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。质谱连用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯和多核芳烃等，液相色谱仪连用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析得到新的发展。液相色谱仪的维护与维修，液相色谱仪常见故障与排除方法：泵：单向阀现象：柱压波动范围很大。原因：单元向阀污染或阀内进入气泡引起。污染使得球与阀座密封不严，液流倒流，压力不稳，或球与阀座粘在一起阻死。气泡进入阀中会紧贴在阀体的一侧，使球难以返回到阀座，引起倒流，使压力和流速变化范围大，有时甚至为零。措施：对于污染用不同极性的一系列溶剂冲洗有可能解决问题，如用25mL水依次冲洗。或拆下进出单向阀放在10%的液内超声清洗30~60min，若仍不解决问题则要更换单元向阀。对于阀内进入气泡不必弄清气泡存在何处，只要打开泄液阀大流速冲洗就可解决问题，在冲洗泵时可用扳手迅速打开泵头上的输出管路，以促进气泡排出。国产液相色谱仪的特点：1、超高速分析：超高的耐压水平：140MPa，可真正实现超高速分析。制备型加压液相色谱，按照色谱柱和样品量的大小，分为：（1）低压液相色谱。因系统耐压增强，有些会导致压力升高的流动相也可使用，这样扩大了可选分析方法的范围，非常适合复杂成分的检测和分析方法的开发。2、高分辨分析：新开发的色谱柱，理论塔板数高达50,000以上，耐压高达140MPa，实现了真正的超高分辨分析。新型二元泵配有冲程可变***柱塞，除了日立特有的LBT*1技术，还标配低容量双螺纹混合器，这些都确保送液时的混合效果和稳定性更好。10mm全反射型毛细管流通池，可有效减小柱外扩散，获得更高分辨。3、高灵敏度分析：二极管阵列检测器的65mm流通池，灵敏度极高，对痕量物质的检测尤为突出。二极管阵列（DAD）检测器的新型光学系统有效地减小了噪音和漂移，保证了高灵敏度的分析结果。自动进样器配有多种清洗模式，标配进样口反冲功能，极大降低了样品残留。色谱柱中的流动相会排干吗？不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。漏气：漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部了的气体进入液相色谱仪的流路内部形成气泡。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，***到正常状态。随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。液相工作者接触多的是流动相，流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5(2~8)，太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的脱落。有报告新商品柱可在pH1.5~10范围操作。正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法反相色谱法固定相极性高～中中～低流动相极性低～中中～高组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出)