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若您养的是贴壁细胞,请先将细胞消化下来;若是悬浮细胞,请直接按以下步骤进行:1.以200-300g离心3分钟,收集细胞。2.用BI冻存液将细胞重悬(不需回温),将细胞密度调整为3~5x106cells/ml,添加到冻存管中(一般每管1ml)。3.建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中,置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜(或不需要程序降温)。4.将冻存管迅速移到液态氮中保存。5.冻存24小时后,建议检测细胞存活率。Dulbecco’sModifiedEagleMedium(DMEM)是目前常使用的改良式Eagles培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。主要用于快速生长的细胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种。DMEM含更高浓度的NaHCO3,要用10%的CO?来平衡,当然也可以在较低CO?浓度下使用。DMEM-高糖(标准型)更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的培养,也可用于杂交瘤中瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。多肽的稳定性研究,引起多肽不稳定的原因:(1)脱酰胺反应:在脱酰反应中,Asn/Gln残基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脱酰胺反应的进行。在Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解,位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。(2)氧化:多肽溶液易氧化的主要原因有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。)