DNA测序检测1.PCR测序反应(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂:所加试剂测定模板管标准对照管BigDyeMix1μl1μl待测的质粒DNA1μ1pGEM-3Zf()双链DNA-1μ1待测DNA的正向引物1μ1M13(-21)引物-1μ1灭菌去离子水2μ12μ1总反应体积5μ1，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，南京分子生物，稍离心。(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪.上进行扩增。98C变性2min后进行PCR循环，分子生物，PCR循环参数为96C10s，50C5s，60°C4min，25个循环，扩增结束后设置4C保温。2.乙醇法纯化PCR产物(1)将混合物离心，将扩增产物转移到1.5mlEP管中。(2)加入25μ1/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12000r/min于4C离心30min，小心弃上清。(3)加70%(V/V)的乙醇50μ1洗涤沉淀2次。12000r/min于4C离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10~15min。3.电泳前测序PCR产物的处理。(1)加入12μ1的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。(2)将溶液转移至盖体分离的0.2mlPCR管中，稍离心。(3)在PCR仪上进行热变性(95C2min)，冰中骤冷，待_上机。4..上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。5.仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。转录组测序转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的RNA的总和，是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不相同的。转录组测序（RNA-Seq）是指利用第二代高通量测序技术进行cDNA测序，快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言，RNA-Seq无需预先设计探针，即可对物种的细胞类型的转录组进行检测，能够提供较的数字化信号，更高的检测通量以及更广泛的检测范围，分子生物学应用，是目前深入研究转录组复杂性的良好工具。lncRNA测序长链非编码RNAs（longnon-codingRNAs，lncRNAs）一般是指长度大于200nt的RNA，分子生物学服务，位于细胞核内或胞浆中，不参与蛋白质编码功能，以RNA形式在多种层面上（表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等）调控基因的表达水平，在生命活动中具有重要作用。长链非编码RNA测序（longnon-codingRNAsequencing，lncRNA-Seq）是一种使用特定方法降低样本中rRNA的丰度，对富集到的RNA进行文库构建，再对高通量测序仪产出的数据进行信息分析的研究方法。lncRNA-Seq可一次性获得样本中全部的lncRNAs信息，对lncRNAs的类别、功能进行的深入分析，从而快速准确地获得与特定生物学过程（例如发育、疾病等）相关lncRNA信息。分子生物学服务-英瀚斯(在线咨询)-南京分子生物由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司（www.enhancer-/）为客户提供“组织病理，细胞生物，分子生物学平台，动物模型医学科研外包服务”等业务，公司拥有“英瀚斯”等品牌，专注于技术合作等行业。欢迎来电垂询，联系人：戴经理。)