RNA提取1.弃去培养液，用PBS清洗两次1-2。2.弃去PBS，用1000u1枪吸干净残余PBS。3.加1mlTRIZOL研磨B41。4.1.5mIEP管标号与每孔相对应备用。5.研磨好的溶液转移至对应的EP管中国。6.往每个EP管中加入250ul，南京分子生物，剧烈震荡30s，冰上静置12min[问l。7.所有样品4C离心，转速:13500转1分钟，时间:15min.8.再次标记一批同样编号EP管。9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的EP管中，再加入400ul异充分混匀。4C冰箱35min。10.4C离心，转速:13500转1分钟，时间:10min.11.弃去.上清液，加1m175%乙醇，轻摇7]。12.4C离心，10600转/分钟，时间:5min.13.弃上清液滤纸吸干。14.加DEPC水10ul溶解，-80C保存。进行逆转录前测浓度。***RNA提取1、剪米粒大小***块放入EP管中标号。2、EP管中加300ultrizol浸泡30分钟或更久。3、用研磨棒研磨，以肉眼很难看到***为宜。4、加700u1trizol静置5分钟。miRNA测序microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。microRNA通过和靶***mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或***mRNA的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达（新发现miRNA也能在转录水平调控***表达）。miRNA在物种进化中相当保守，在动物、植物和***等中发现的miRNA表达均有严格的***特异性和时序性。miRNA在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。目前研究miRNA的方法主要是realtime-PCR、生物芯片技术以及第二代测序技术。基于第二代测序技术的miRNA测序，可以一次获得数百万条miRNA序列，能够快速鉴定出不同***、不同发育阶段、不同***状态下已知和未知的miRNA及其表达差异，为研究miRNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。动物***细胞***组DNA提取操作步骤1.取新鲜或冰冻动物***块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，分子生物学应用，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见***块，转入1.5ml离心管中，加入蛋白酶K（500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。2.加2倍体积异，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul吸头挑出，凉干，用200ulTE重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）3.加等量的酚??振荡混匀，离心12000rpm，5min。4.取上层溶液至另一管，分子生物仪器，加入等体积的?，振荡混匀，离心12000rpm，5min。5.取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min，离心12000rpm，10min。6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。7.用1ml70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000rpm，5min。8.小心倒掉上清液，常用的分子生物学技术，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。9.加200ulTE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。南京分子生物-英瀚斯-分子生物仪器由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司（www.enhancer-/）为客户提供“***病理，细胞生物，分子生物学平台，动物模型***科研外包服务”等业务，公司拥有“英瀚斯”等品牌，专注于技术合作等行业。欢迎来电垂询，联系人：戴经理。)