对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于使用温度10-20℃左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后，记录并观察基线。初始阶段基线应持续上升，在到达老化温度后5-10分钟开始下降，并且会持续30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃以下，尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化，不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。下面就这两分别展开讨论（流动相以甲1醇为例，色谱柱以C18为例）。液相色谱仪维护排查主要指的是定期对仪器常用的耗材，部件进行检查、更换和维护。常见的耗材维护包括气体净化装置（除水、除氧和除烃装置）、气相色谱仪进样口进样垫（进样隔垫、***垫）、衬管、O型圈、分流部件（分流平板、毛细柱适配器）和分流捕集阱等，气相色谱仪部件维护则主要包括色谱柱的老化、FID检测器喷嘴、收集极的清洗，ECD的高温老化等。液相色谱仪在安装时要考虑到室内的温度和湿度，控制在温度为5--35℃，湿度控制在0--85%的范围内，保持恒温、恒湿。只有这样，仪器才能发挥的性能，才能保证仪器的使用寿命。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或为流动相。液相色谱仪的常规操作及维修：1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3、打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。7、设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a、进样前的稳流，一般2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject转换；如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值会。d、走样时间，随不同的样品而不同。8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击trun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5(2~8)，太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的脱落。有报告新商品柱可在pH1.5~10范围操作。常用固定相有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流动相为水、等各种。正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法反相色谱法固定相极性高～中中～低流动相极性低～中中～高组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出)