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湿法装柱:一般是将树脂装至柱高的三分之二处,用水进行反洗,使树脂松散,展开,将树脂的微细粉末及一些机械杂质去除。然后放出水,至水面略高于树脂的层面,接着用酒精以适当的流速淋洗,至流出的酒精中无油溶性杂质为止,后用水洗出酒精即可使用,这样可以洗去小分子有机物。吸附层析流动相选择:考虑被分离物质性质,吸附剂的活性,展开剂的极性。分配层析法:基于混合物各组分在固定相与流动相之间的分配性质不同而实施的一种层析方法。原理:当一种溶质分布在两个互不相容的溶剂中时,它在固定相和流动相两相内的的浓度之比是个常数,成为分配系数。分配层析分离各种不同的化合物的本质是化合物在两相中的分配系数因为化合物结构不同而产生分配系数的差异。色谱条件的选择由于中药有效成分类型不同,性质各异,所以选择色谱条件是不同的。一般生物1碱的分离可用硅胶或氧化铝柱色谱,对于极性较高的生物1碱可用分配色谱,而对季铵型水溶性生物1碱也可用分配色谱或离子交换色谱。苷类的色谱分离往往决定于苷元的性质,如皂苷、苷,一般可用分配色谱或硅胶吸附色谱。挥发油、甾体、萜类包括萜类内酯,往往氧化铝及硅胶色谱。黄酮类化合物、鞣质等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附色谱。有机酸、氨基酸一般可选用离子交换色谱,有时也用分配色谱。有些氨基酸也可用活性炭吸附色谱。对于大分子化合物,如多肽、蛋白质、多糖,常用凝胶色谱。总的来说,对非极性成分往往考虑用氧化铝或硅胶吸附色谱;若极性较大则采用分配色谱或弱吸附剂吸附色谱;对酸性、碱性、成分可采用离子交换色谱,有时也可用吸附色谱及分配色谱等。按流动相与固定相的不同划分:气相层析、液相层析。这两大类层析是以流动相不同来划分的。如同时区分流动相和固定相,划分为:气固层析、气液层析、液固层析和液液层析等。按操作形式划分:柱层析、纸层析、薄层层析、高1效液相层析等。柱层析:将固定相装于柱内,使样品沿一个方向移动而达到分离。纸层析:用滤纸做液体的载体,点样后,用流动相展开,以达到分离鉴定的目的。薄层层析:将适当粒度的吸附剂铺成薄层,以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。以上划分无严格界限,有些名称相互交叉,如亲和层析应属于一种特殊的吸附层析,纸层析是一种分配层析,柱层析可做各种层析。)
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