武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。植物细胞壁抗降解屏障是限制秸秆生物质资源化***转化利用的关键因素,而木质纤维素的阿魏酸化是禾本科植物细胞壁抗降解屏障形成的重要分子基础。植物阿魏酰基转移酶(Feruloyltransferase)是负责将阿魏酸从阿魏酰CoA转移至阿拉伯木聚糖分子上的关键酶之一,在阿拉伯木聚糖与木质素的连接上起到关键作用,与植物细胞壁抗降解屏障的形成关系十分密切,因此对阿魏酰基转移酶***开展研究将可以为禾本科能源植物开发利用以及农作物秸秆的再生利用提供新的思路。本文对禾本科模式植物二穗短柄草(Brachypodiumdistachyon)中的一个可能的阿魏酰基转移酶***Bra1进行研究,其主要研究结果如下:1.以二穗短柄草成熟茎***mRNA为材料,采用RT-PCR技术得到了Bra1(5g14720)***的全长cDNA序列,其序列大小为1369bp,生物信息学分析表明该***的开放阅读框(ORF)编码443个氨基酸残基,其编码蛋白质的理论分子质量为48.45kDa。进一步的***原核表达以及蛋白质谱分析也表明该***的开放阅读框能正确编码一个BAHD酰基转移酶蛋白,其分子量大小与理论值基本一致。2.Bra1编码蛋白的氨基酸序列中包含有BAHD酰基转移酶家族特有的HXXXD功能区以及DFGWG保守结构域,说明Bra1***是BAHD酰基转移酶***家族的一个成员。脂肪族昔(aliphaticglucosinolates,AGSL)是一种广泛存在于十字花科植物中的含氮、含硫的植物次生代谢产物,其降解产物(如萝卜硫素)不仅在植物防御、响应生物或非生物胁迫的生理过程中具有重要的作用,而且还具有极强的活性。MYB28和MYB29是调控脂肪族GSL生物合成的两类重要转录因子。在拟南芥中MYB28和MYB29直接调控脂肪族苷的合成。在十字花科蔬菜中,青花菜中的苷含量***为丰富,成分更为复杂,目前国内外对青花菜AGSL生物合成途径中的结构***研究的较多,而对其中起调控作用的转录因子的研究则相对较为滞后。CaNZ是CaN(Calcineurin)***的正义表达***,是在真核生物中存在的一个Ca2及CaM依赖的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它包括一个催化亚基calcineurinA和一个Ca2结合亚基calcineurinB,其催化亚基calcineurinA活性受CaM调节。本实验在筛选***再生体系基础上,利用带有信号肽和CaM结合肽的载体,以农为媒介将CaN***导入中,预期过表达的融合蛋白将会被分泌到细胞外并与质外体CaM相结合,***质外体CaM的功能,从而构建出质外体CaM的反义植株,观察质外体CaM反义植株的表型改变,为进一步开展CaM在植物生长发育过程中的功能研究提供基础。研究结果如下：(1)以14-16d叶片为外植体,以MS为基本培养基,通过附加配方对比,筛选出适合材料再生的培养基配方：MSIAA0.5mg·L-16-BA1.5mg·L-1为芽分化的培养基,1/2MSNAA0.1mg·L-1为生根培养基。(2)用Kan进行叶片抗性筛选。当Kan浓度小于50mg·L-1时,叶片能正常分化出芽；当Kan浓度为75mg·L-1时,叶片大多数白化；当Kan浓度超过100mg·L-1时,芽分化停止。所以,以Kan浓度100mg·L-1为叶片分化芽抗性筛选的临界浓度；而培养物根对较为敏感,Kan50mg·L-1为筛选临界值。)