武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。***转运蛋白P-typeATPase(HMA)已被证实参与植物体内的***运输,HMA5主要参与铜的转运。在模式植物拟南芥、水稻和黄瓜中对HMA5***进行了较多的研究,但是对豆科植物HMA5的研究鲜见报道。实验室前期在天蓝苜蓿中分离到一个与铜胁迫及共生结瘤相关的HMA5***,为了对此类***在豆科植物共生结瘤中的作用进行深入研究,本研究对全***组已测序的模式豆科植物蒺藜苜蓿的***组进行筛查,寻找HMA5同源***并通过表达模式分析初步判断其与共生结瘤的关系,在此基础上,以其中的MTR_8g079250***为对象,进行亚细胞***、***表达、RNA干扰和过量表达等研究,初步鉴定该***在共生结瘤中的功能。1、MTR_8g079250的亚细胞***构建MTR_8g079250的洋葱表皮亚细胞***载体,通过***枪轰击转化洋葱表皮细胞,在激光共聚焦显微镜下观察到MTR_8g079250::GFP融合蛋白主要在细胞膜上表达,在细胞核上也有微量的表达；构建MTR_8g079250的叶片亚细胞***载体,通过根***农介导***叶片的方式进行转化,结果表明目的***主要***在细胞膜和细胞核上；2、MTR_8g079250的***表达构建PMTR_8g079250::GUS融合表达载体,通过农发根转化的方式转入蒺藜苜蓿根部,经培养后,进行GUS染色观察。武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。植物细胞壁抗降解屏障是限制秸秆生物质资源化***转化利用的关键因素,而木质纤维素的阿魏酸化是禾本科植物细胞壁抗降解屏障形成的重要分子基础。植物阿魏酰基转移酶(Feruloyltransferase)是负责将阿魏酸从阿魏酰CoA转移至阿拉伯木聚糖分子上的关键酶之一,在阿拉伯木聚糖与木质素的连接上起到关键作用,与植物细胞壁抗降解屏障的形成关系十分密切,因此对阿魏酰基转移酶***开展研究将可以为禾本科能源植物开发利用以及农作物秸秆的再生利用提供新的思路。本文对禾本科模式植物二穗短柄草(Brachypodiumdistachyon)中的一个可能的阿魏酰基转移酶***Bra1进行研究,其主要研究结果如下:1.以二穗短柄草成熟茎***mRNA为材料,采用RT-PCR技术得到了Bra1(5g14720)***的全长cDNA序列,其序列大小为1369bp,生物信息学分析表明该***的开放阅读框(ORF)编码443个氨基酸残基,其编码蛋白质的理论分子质量为48.45kDa。进一步的***原核表达以及蛋白质谱分析也表明该***的开放阅读框能正确编码一个BAHD酰基转移酶蛋白,其分子量大小与理论值基本一致。2.Bra1编码蛋白的氨基酸序列中包含有BAHD酰基转移酶家族特有的HXXXD功能区以及DFGWG保守结构域,说明Bra1***是BAHD酰基转移酶***家族的一个成员。为建立根***农介导的香蕉***遗传转化系统，本研究以雄性花诱导产生的贡蕉胚性悬浮系为转化受体，从潮筛选浓度和筛选方法两方面进行了优化。研究结果表明，贡蕉悬浮系在M2液体培养下潮的适合筛选浓度为5mg/L。将液体共培养7d后的贡蕉胚性悬浮系转接到M2液体筛选培养基进行培养，每10d继代一次。GUS***染色表明，经过3代抗性筛选的ECS几乎全为转化细胞。经过3个月的胚诱导培养获得成熟抗性体细胞胚，平均抗性体细胞胚得率为4580个／mLPCV。同时，转化苗的PCR检测结果表明，gus***已整合到贡蕉***组中。本研究表明液体筛选系统有利于转化胚性悬浮细胞的增殖，大大地提高了香蕉转***的转化效率。)