武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞***及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE2000)为载体分别以Cθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式细胞仪分析其表达率,激...选取含有氯嘧磺隆抗性标记的ILV1***和报告***GFP二元载体的农AGL-1，采用单因子和双因子方法研究根***农AGL-1介导柱花草菌CH008转化过程中各主要因素对转化率的影响，优化构建ATMT转化柱花草胶孢菌体系条件，使转化效率达到300～400个转化子/106个孢子，即根***农AGL-1浓度OD600=0.8，菌分生孢子浓度为1×106个/mL，AS浓度为100μmol/L，诱导时间为6h，共培养温度和时间分别为25℃和4d。经PCR检测都有GFP片段，并能够表达绿色荧光蛋白。这为进一步开展菌对柱花草的致病机理研究提供了依据，优化转化体系有利于后续突变体库的扩大、筛选突变体和致病功能***的研究。武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。CaNZ是CaN(Calcineurin)***的正义表达***,是在真核生物中存在的一个Ca2及CaM依赖的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它包括一个催化亚基calcineurinA和一个Ca2结合亚基calcineurinB,其催化亚基calcineurinA活性受CaM调节。本实验在筛选***再生体系基础上,利用带有信号肽和CaM结合肽的载体,以农为媒介将CaN***导入中,预期过表达的融合蛋白将会被分泌到细胞外并与质外体CaM相结合,***质外体CaM的功能,从而构建出质外体CaM的反义植株,观察质外体CaM反义植株的表型改变,为进一步开展CaM在植物生长发育过程中的功能研究提供基础。研究结果如下：(1)以14-16d叶片为外植体,以MS为基本培养基,通过附加配方对比,筛选出适合材料再生的培养基配方：MSIAA0.5mg·L-16-BA1.5mg·L-1为芽分化的培养基,1/2MSNAA0.1mg·L-1为生根培养基。(2)用Kan进行叶片抗性筛选。当Kan浓度小于50mg·L-1时,叶片能正常分化出芽；当Kan浓度为75mg·L-1时,叶片大多数白化；当Kan浓度超过100mg·L-1时,芽分化停止。所以,以Kan浓度100mg·L-1为叶片分化芽抗性筛选的临界浓度；而培养物根对较为敏感,Kan50mg·L-1为筛选临界值。)