安徽洋葱亚细胞***电话
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。目的构建通用型植物GFP标签蛋白表达载体,研究蛋白质的细胞内***对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法构建2种GFP标签蛋白质表达载体,分别在GFP的N和C端预留位点,以目的***。利用该***载体,分别内切酶FokI的切割结构域与MS2噬菌体外壳蛋白MCP的串联蛋白(FokI:MCP:FokI,FMF)至GFP的N和C端,得到FMF与GFP的融合蛋白GFP:FMF和FMF:GFP,其中FMF的N端带有细胞核***信号。利用农介导植物瞬时表达侵染本氏和洋葱表皮细胞,观察GFP荧光表达情况。结果成功构建了2种融合了目的***和GFP的表达载体pER35GFP-FMF和pER35FMF-GFP。激光共聚焦结果显示侵染了只含GFP载体的农的细胞,可在细胞核和细胞质中检测到GFP的绿色荧光,而侵染了含核***信号FMF:GFP和GFP:FMF2种融合蛋白载体的农的细胞,只在细胞核中观察到绿色荧光。结论该载体系统可运用于研究蛋白质在植物细胞中的亚细胞***,具有简单、***和通用性的特点。胞质Ca~(2)是重要的第二信使,通过Ca~(2)结合蛋白产生磷酸化信号级联,调控下游***表达。钙依赖而钙调素不依赖的蛋白激酶(calcium-dependent/calmodulin-independentproteinkinases,CDPKs)是一类仅在植物和部分原生生物中存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在钙信号转导中具有重要功能。越来越多的证据表明,CDPKs广泛参与植物生长发育、病原防御、非生物环境胁迫等生理反应的信号传递过程。目前在水稻中已发现31个CDPKs***,但功能明确的只有少数几个***,本研究的目的就是利用超量表达和RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术分析水稻OsCPK2、OsCPK15和OsCPK29的功能,为利用***工程技术培育水稻新品种提供新的***资源和理论指导。本研究的主要试验结果如下:1.通过RT-PCR方法检测了OsCPK2、OsCPK15和OsCPK29三个***在粳稻品种日本晴分蘖期的根、成熟叶片、穗尖至剑叶叶枕距离分别为0cm、0-1cm、1-3cm、3-5cm、5-8cm、8-12cm、12-16cm、16-20cm、20-25cm、25-30cm、灌浆期稻穗(命名为P1-P12)中的表达谱。试验结果显示:OsCPK2和OsCPK29时期稻穗中表达量较高,在成熟叶片和P12时期稻穗中表达量很低,在分蘖期的根和幼穗中不表达;而OsCPK15在所检测的各个***和时期中表达量均很高。本研究旨在通过对根***农侵染洋葱表皮细胞的条件进行优化,从而建立一种新的瞬时表达系统,并将其应用于玉米In5-2启动子的功能区域的分析中,明确In5-2启动子的乙酰类化合物诱导元件的具体位置。在本研究中采用根***农(Agrobacteriumtumefaciens)侵染洋葱(Alliumcepa)表皮细胞,对转β-葡糖醛酸酶(GUS)***的瞬时表达进行研究,并分析了侵染液中乙酰丁香酮(As)的浓度、侵染时间、菌液浓度、共培养时间对GUS***的瞬间表达的影响。结果显示,在OD600值为0.8的农液中15min,共培养3d,能够得到较高的GUS***瞬间表达,从而建立了一种新的瞬间表达系统。同时,构建了含不同长度的玉米(Zeamays)In5-2启动子片段缺失载体,利用新的瞬时表达系统分析其功能区域,推测出乙酰类化合物诱导元件位于ATG上游-220~-143bp之间。结果表明新的瞬时表达系统可以快速有效地进行启动子的分析。)