细胞ELISPOT检测1．培养板的预处理：在24孔培养板内加0.5ml0.2%戊er醛，37℃，4h，弃掉板中的处理液，用PBS洗涤3次，每次3min；2．抗原包被：将适量抗原溶于包被缓冲液中，每孔加入0.5ml，4℃过夜，PBS-T洗涤3次，每次3min；3．制备细胞悬液：将待测已致敏小鼠处死，取出pi脏，***细胞，置于加有Hanks液的平皿内，用钝头直角9号zhu射器针头破少许脾被膜后，赶出细胞，用毛细吸管轻轻吹散细胞团后，成都细胞，将悬液通过250目尼龙网，取滤液，1000r/min离心5min，Hanks液洗涤3次，计数细胞后，用1640液重新悬浮细胞，配成所需浓度；4．往各孔中加入0.5ml含不同浓度（104-106/ml）的细胞悬液，置37℃，5％CO2条件下孵育2-4h，弃掉培养液，PBS-T洗涤3次，每次3min；5．往各孔中加入0.5ml生物素化抗ti（Bio-Ab）（2μg/ml），37℃孵育1h或4℃过夜，弃掉液体，PBS-T洗涤3次，每次3min；6．加入辣根过氧化物酶结合的亲合素（***i-HRP）（2μg/ml），37℃孵育30min，弃掉液体，动物细胞培养，PBS-T洗涤3次，每次3min；7．配制明胶-底物液：在37℃水浴中，将2.5mlTMB溶液（4mg/mljia醇溶液）滴加入7.5ml10%明胶溶液（用pH5.0磷酸钠-柠檬酸缓冲液配制）边加边搅，溶液呈白色，加入14μl3%H202；8．显色与计数：将培养板底冰浴，每孔加入0.6ml明胶-底物液，约3min，混合液凝固，将培养板取出，置室温5min，将板倒置，用肉眼和低倍放大镜计数所显示出的颜色的斑点。二、脂质体转染操作步骤1、操作步骤[方法一]：(1)细胞培养：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1～2×105个细胞培养液，37℃CO2培养至40%～60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。(2)转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含培养基稀释1-10μgDNA，终量100μL，B液：用不含培养基稀释2-50μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，细胞融合实验报告，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。(3)转染准备：用2mL不含培养液漂洗两次，再加入1mL不含培养液。(4)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6～24小时，吸除无转染液，换入正常培养液继续培养。(5)其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。注意：转染时切勿加，对转染效率有很大影响。透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边.集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。结果评判:调亡细胞体积变小，细胞质浓缩。调亡I期(pro-apoptosisnuclei)的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象(c***itati)的空泡结构;IIa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生调亡小体。成都细胞-***细胞-英瀚斯(推荐商家)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司在技术合作这一领域倾注了诸多的热忱和热情，英瀚斯一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创辉煌。相关业务欢迎垂询，联系人：戴经理。)