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原位杂交杂交液注意事项:(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、***葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等。(2)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与***标本之间的静电结合。甲酰胺可使Tm降低,杂交液中含每1%的甲酰胺可分别使RNA:RNA,植物染色体原位杂交技术服务,RNA:DNA,DNA:DNA的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的***形态结构的***以及标本的脱落。***葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链核酸探针)。在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等,都是为了阻断探针与***结构成分之间的非特异性结合,以减低背景。分子病理学诊断主要应用于以下几个方面:1、对于肿l瘤易感***的检测,对于肿l瘤高危人群的筛检具有实用价值,如检测GSTπ***以判定个体暴露于致***物是的致******性。2、肿l瘤相关病毒的检测,如采用原位杂交方法检测标本中HPV、EBER等病毒。3、疑难肿l瘤的诊断和分类,尤其在鉴别诊断淋巴细胞增l生性***与淋巴细胞性肿l瘤上有着强大的特异性和可靠性。4、肿l瘤的个体化治l疗,能够根据肿l瘤发生l发展不同阶段分子水平的特点,对肿l瘤的个体化和预见性治l疗具有指导意义。5、肿l瘤的预后判断,如采用荧光原位杂交技术(FISH)检测HER-2***在乳l腺l***病例中的表达情况,配合术后治l疗,指导临床用药选择。FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中常用的一类核酸探针。利用此探针可对***、细胞或染色体中的DNA进行染色体及***水平的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。植物染色体原位杂交技术服务-科锐诺(在线咨询)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。行路致远,砥砺前行。武汉科锐诺生物科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴,更矢志成为技术合作具有竞争力的企业,与您一起飞跃,共同成功!)
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