脂质体瞬时转染1、细胞H9C2(Hela)6孔板Hela1x10°/孔。2、转染前换上没有抗sheng素的DMEM+胎清(10%)。3、将质粒DNA(约2-4ul)2ul加入dorf管中+DMEM至50u1。4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。8、培养24小时。软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:(1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活l细胞计数，用含20%胎牛血l清的DMEM培养液调整细胞密度至1x106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。(2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40日中不会凝固。(3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2xDMEM培养基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后，取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7~10mL)，冷却凝固，可作底层琼脂置CO2温箱中备用。(4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2xDMEM培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2mL的细胞悬液，充分混匀，细胞实验外包哪家好，注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中，逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入37回5%CO2温箱中培养10~14天。(5)把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞数。计算形成率。软琼脂培养法常用检测肿l瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40日。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克l隆形成试验。软琼脂集落形成率实验(软琼脂克l隆)将1.2%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合制备0.6%的底层琼脂，细胞实验外包公司，6孔板中每个孔1.4ml温室凝固，取对数期细胞，胰酶消化后吹散成单个细胞悬液，计数，并调细胞浓度为10000个/ml，将0.6%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合，制备0.3%的上层琼脂，每孔加1ml上层琼脂和100ul单细胞悬液(约1000ell/wel)，混匀，室温凝固。置于37目，5%CO2的细胞培养箱中培养2-3周，计数含50个细胞以上得克l隆，计算细胞集落形成率，细胞实验外包选哪家，Spotll采集图像。关于细胞培养的常见问题Q：培养液到底要不要加双抗（青&链）？A：双抗不是细胞生长必需的。我们培养细胞时不常规使用，因为连续使用会促进耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。一旦将从培养液中去除，这种轻度污染终将发展成为大规模污染。具体情况，可根据自己实验室的环境，自行决定是否使用双抗。Q：细胞培养，上海细胞实验，能更换成其它种类的培养基吗？A：我们强烈建议好使用细胞提供机构或细胞库推荐的生长培养液。有些细胞可能会适应在不同培养基中生长，在做好保种的条件下，可以分出部分细胞做测试。上海细胞实验-细胞实验外包哪家好-英瀚斯(推荐商家)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。“***病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务”选择南京英瀚斯生物科技有限公司，公司位于：江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301，多年来，英瀚斯坚持为客户提供好的服务，联系人：戴经理。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。英瀚斯期待成为您的长期合作伙伴！)