3.引物的OD数如何定量？答：引物合成引物OD数是这样测定的：用紫外分光光度计，波长260nm，石英比色杯，光程为1厘米，测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，用1ml水稀释测OD值。需要根据稀释倍数换算出母液的OD值。4.需要什么级别的引物？答：引物常用的纯化方式脱盐、BioRP/OPC纯化、PAGE纯化、HPLC纯化。根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。25.PCR扩增不出就引物有问题吗？答：基本不是。当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出、扩增效率低的问题。如巢式PCR就是扩增那些拷贝数很低的***片段。有些重复片段的扩增，GC含量高的片段，非要采用特殊扩增手段才能扩增出了。引物扩增不出，pcr，主要是下列两种情况比较常见：（1）RT-PCR。请注意，很多***通过常规RT-PCR方法是很难扩增出来的。RT-PCR成功的关键在于RT的反应的RNA质量和目标***在特定***和细胞中含量。（2）从***组中扩增。一般情况下，PCR，***在***组中都是单拷贝，***组作为模板需要严格控制用量。***组DNA过高，会影响反应体系中的Mg和pH20.Primer设计的基本原则是什么？答：引物设计的下列原则供您参考。◆引物长度一般在18-35mer。◆G-C含量控制在40-60%左右。◆避免近3端有酶切位点或发夹结构。◆如果可能避免在3端5个碱基有2个以上的G或C。◆如果可能避免在3端1个碱基为A。◆避免连续相同碱基的出现，特别是要避免GGGG或更多G出现。◆退火温度Tm控制在58-60C左右。◆如果是设计点突变引物，pcr检测，突变点应尽可能在引物的中间。21.为什么引物的OD260/OD280小于1.5？答：引物应该全是DNA，但是OD260/OD280的比值为什么那么低，荧光定量pcr，怎么会有蛋白质污染？引***学合成，哪里有机会污染到蛋白质？需要指出的是OD260/OD280的比值不能用来衡量引物的纯度。OD260/OD280的比值过低一般是由于引物中C/T的含量比较高所致。下表是一个20mer同聚体引物的OD260/OD280的比值，清楚表明OD260/OD280的比值与引物的碱基组成密切相关。pcr检测-pcr-英瀚斯生物科技公司由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司坚持“以人为本”的企业理念，拥有一支高素质的员工***，力求提供更好的产品和服务回馈社会，并欢迎广大新老客户光临惠顾，真诚合作、共创美好未来。英瀚斯——您可信赖的朋友，公司地址：江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301，联系人：戴经理。)