腺病毒包装原理介绍腺病毒是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒，由252个壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链DNA分子，两端各有长约100bp的反向重复序列。***腺病毒已知有33种，分别命名为ad1-ad33，研究详细得是ad2.腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒，遗传物质为线型双股DNA形式。腺病毒的特点：（1）gan染范围广对人致病性低；（2）对增殖和非增殖细胞均具有gan染性；（3）能有效进行增殖；（4）病毒滴度高；（5）不整合到染色体中，无插入致突变性；(6)外源***装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体外***转导、体内接种yi苗、和***zhi疗等各个领域。实验方法1.获得目的***序列；2.构建病毒表达载体质粒；3.表达载体质粒和包装质粒重组；4.gan染HEK293，包装出病毒；5.病毒扩增、浓缩；6.滴度测定。分子实验介绍——荧光定量PCR检测荧光定量PCR是检测生物样品中RNA含量的普遍的方法，通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，荧光定量pcr，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。目前主要使用Sybrgreen和taqman法对RNA含量进行检测。Sybrgreen在低样本量时成本较低，目前选用的较多。SYBRGreenI是一种只与DNA双链结合的荧光染料。当它与DNA双链结合时，发出荧光；从DNA双链上释放出来时，pcr实验室，荧光信号急剧减弱。因此，在一个体系内，其信号强度代表了双链DNA分子的数量。SYBRGreen荧光染料法定量PCR的基本过程是：1、开始反应，当SYBRGreen染料与DNA双链结合时发出荧光。2、DNA变性时，SYBRGreen染料释放出来，荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中，引物退火并形成PCR产物。4、聚合完成后，SYBRGreen染料与双链产物结合，定量PCR系统检测到荧光的净增量加大。实验流程：细胞或***RNA提取-RNA浓度检测-RNA逆转录-定量PCR检测。结果示例：图A***扩增曲线图；B***扩增溶解曲线图；CmRNA相对表达量变化从图中可以扩增曲线可以看出目的RNA扩增效果，溶解曲线可以看出引物识别特异性情况，通过使用ΔΔCt方法计算可以得到每个组中目的mRNA表达变化。DNA测序检测1.PCR测序反应(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，pcr，按下表加***:所加***测定模板管标准对照管BigDyeMix1μl1μl待测的质粒DNA1μ1pGEM-3Zf(+)双链DNA-1μ1待测DNA的正向引物1μ1M13(-21)引物-1μ1灭菌去离子水2μ12μ1总反应体积5μ1，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，稍离心。(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪.上进行扩增。98C变性2min后进行PCR循环，PCR循环参数为96C10s，50C5s，60°***min，25个循环，扩增结束后设置4C保温。2.乙醇法纯化PCR产物(1)将混合物离心，将扩增产物转移到1.5mlEP管中。(2)加入25μ1/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12000r/min于4C离心30min，小心弃上清。(3)加70%(V/V)的乙醇50μ1洗涤沉淀2次。12000r/min于4C离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10~15min。3.电泳前测序PCR产物的处理。(1)加入12μ1的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。(2)将溶液转移至盖体分离的0.2mlPCR管中，稍离心。(3)在PCR仪上进行热变性(95C2min)，冰中骤冷，待_上机。4..上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。5.仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与***。pcr实验室-pcr-南京英瀚斯由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司是江苏南京,技术合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在英瀚斯***携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创英瀚斯更加美好的未来。)