2、快速脂质体转染法操作步骤如下[方法二]：(1)以5×105细胞/孔接种6孔板(或35mm培养皿)培养24小时，使其达到50～60%板底面积。(2)在试管中配制DNA/脂质体复合物方法如下：①在1mL无DMEM中稀释PSV2-neo质粒DNA或供体DNA。②旋转1秒钟，再加入脂质体悬液，细胞实验外包选哪家，旋转。③室温下放置5～10分钟，使DNA结合在脂质体上。(3)弃去细胞中的旧液，用1mL无DMEM洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入1mLDNA/脂质体复合物，37℃培养3～5小时。(4)再于每孔中加入20%FCS的DMEM，继续培养14～24小时，(5)吸出DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜10%FCS的DMEM，2mL/孔，再培养24～48小时。(6)用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。3、稳定的脂质体转染方法如下：(1)接种细胞同前，细胞实验外包，细胞长至50%板底面积可用于转染。(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前(2)、(3)步骤。(3)在每孔中加入1mL、20%FCS的DMEM，37℃培养48小时。(4)吸出DMEM，细胞实验外包费用，用G418选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。细胞培养中常见的污染及解决方法霉菌污染正常情况下，培养基在37℃培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，细胞实验，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。解决方法：用***铜溶液擦拭CO2培养箱，向托盘中加入饱和***铜或消毒后加入饱和磷酸氢二钠高盐溶液，避免霉菌污染。如果霉菌污染，暂时转移所有细胞，并立即使用guo氧擦拭培养箱，包括层板和内壁。将guo氧放在培养箱中一小时，使蒸汽扩散，待guo氧气味消散后，将细胞转移到培养箱中。值得注意的是，培养箱需要每两个月定期清洗一次，尤其是在梅雨季节。用84消毒液、清水和75%酒精连续擦拭培养箱，用紫外线照射也是一种有效的方法。为防止霉菌污染，需添加3μg/ml、***素、fang线菌素D或青链。一旦被污染，就不可能***，即使使用上述，也没有什么区别。对于支原体污染的细胞培养，选择是丢弃污染的培养物，并用使用新鲜的无支原体的储存液，消毒环境。如果所有的细胞都被污染了，那可能是整个培养系统污染了。因此，必须对培养基和实验设备进行检查。如果只是个别污染，可能是操作问题，有必要注意实验操作步骤的规范。骨sui内皮祖细胞的分离培养方法:使用密度梯度离心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞，在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133表达情况.结果与结论:培养前4d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞，CD133+细胞占19.2%，CD34+细胞占28.7%，CD34+/CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.细胞实验-英瀚斯-细胞实验外包由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司在技术合作这一领域倾注了诸多的热忱和热情，英瀚斯一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创辉煌。相关业务欢迎垂询，联系人：戴经理。)