Q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响？A:（1）细胞生长，感受态细胞，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。（2）过滤，如果中出现大量的沉淀物，将很难过滤。一般说来，因为在生产工序中已经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的。在实验室中没有必要再过滤处理，在大规模的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起过滤。（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定被污染了。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但终确定没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有***生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。细胞ELISPOT检测1．培养板的预处理：在24孔培养板内加0.5ml0.2%戊er醛，37℃，4h，弃掉板中的处理液，用PBS洗涤3次，每次3min；2．抗原包被：将适量抗原溶于包被缓冲液中，每孔加入0.5ml，4℃过夜，PBS-T洗涤3次，每次3min；3．制备细胞悬液：将待测已致敏小鼠处死，取出pi脏，置于加有Hanks液的平皿内，用钝头直角9号zhu射器针头破少许脾被膜后，赶出细胞，用毛细吸管轻轻吹散细胞团后，将悬液通过250目尼龙网，取滤液，1000r/min离心5min，Hanks液洗涤3次，计数细胞后，用1640液重新悬浮细胞，配成所需浓度；4．往各孔中加入0.5ml含不同浓度（104-106/ml）的细胞悬液，置37℃，5％CO2条件下孵育2-4h，弃掉培养液，PBS-T洗涤3次，每次3min；5．往各孔中加入0.5ml生物素化抗ti（Bio-Ab）（2μg/ml），37℃孵育1h或4℃过夜，弃掉液体，单细胞测序技术，PBS-T洗涤3次，徐州细胞，每次3min；6．加入辣根过氧化物酶结合的亲合素（***i-HRP）（2μg/ml），37℃孵育30min，弃掉液体，PBS-T洗涤3次，每次3min；7．配制明胶-底物液：在37℃水浴中，将2.5mlTMB溶液（4mg/mljia醇溶液）滴加入7.5ml10%明胶溶液（用pH5.0磷酸钠-柠檬酸缓冲液配制）边加边搅，溶液呈白色，加入14μl3%H202；8．显色与计数：将培养板底冰浴，每孔加入0.6ml明胶-底物液，约3min，混合液凝固，将培养板取出，置室温5min，将板倒置，用肉眼和低倍放大镜计数所显示出的颜色的斑点。细胞实验介绍——流式细胞术检测细胞周期和凋亡流式细胞术检测细胞周期：细胞周期：指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G0/G1期：有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上无法与G1期区分，细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S期：DNA开始合成，细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。G2期和M期：当DNA成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，细胞培养，从而计算出各个期的百分含量。一般流程：细胞收集-70%酒精固定过夜-PI染色-流式细胞仪检测。细胞凋亡：细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在之前，检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。利用这一原理，可以将AnnexinV标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)来区分凋亡和坏死细胞。PI的膜通透性很差，因而只能标记坏死的细胞。一般流程：细胞收集-PI-AnnexinV标记-流式细胞仪检测。结果示例：图A细胞周期检测图；B细胞凋亡检测图感受态细胞-徐州细胞-南京英瀚斯生物科技(查看)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司位于江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前英瀚斯在技术合作中享有良好的声誉。英瀚斯取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。英瀚斯全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)