酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致***作用，应注意防护。有条件者应使用不致***、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。包括以下步骤：1)抗原表位的计算机筛选；2)抗原的制备；3)血l清的采集；4)间接ELISA方法的建立；5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证；6)***盒的稳定性验证；7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出感l染猪的戊型肝l炎病毒，cGMPassaykit，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝l病毒的流行和阻断戊肝l病毒由猪向人传播。实验步骤使用前将各种***取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。快速加入***至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。1.依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。2.移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。3.移取100μL0.1MHCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0pmol/mLcAMP标准品)。4.移取100μLcAMP标准品至相应的孔。5.移取100μL样品至相应的孔。6.移取50μL0.1MHCl至NSB(非特异结合)孔。7.移取50μL偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。8.移取50μL抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。9.将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。10.在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。11.后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。12.加5μL偶联酶至TA(全活性)孔。13.每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）14.每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。15.清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。cGMPassaykit-纽斯特生物技术由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。武汉纽斯特生物技术有限公司是从事“G蛋白活性,cAMP和cGMPELISA***盒,蛋白点突变”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：黄经理。)